vse-zabolevaniya.ru Подберем лучшего врача в Москве
звоните: 7 (499) 116-78-36
ГлавнаяМикробиологияВирусы парагриппа и парагрипп

Вирусы парагриппа и парагрипп

ссылки

Вирусы парагриппа человека (ВПГЧ)

Первые штаммы были выделены в 1956 г. в США Р. Чаноком от детей с острыми респираторными заболеваниями. В настоящее время известно 5 серотипов вируса парагриппа (ВПГЧ-1 - ВПГЧ-5).Парагриппозные вирусы обладают более выраженной гемадсорбирующей активностью, которая проявляется в инфицированных культурах клеток при добавлении эритроцитов морской свинки. Они характеризуются также наличием гемагтлютинирующих свойств, которые неодинаково выражены у разных серотипов в отношении эритроцитов различных животных и человека. Все серотипы обладают нейраминидазной активностью, а также умеренно выраженными гемолитичекими и симпластобразующими свойствами. Они репродуцируются в первичных и перевиваемых культурах клеток человека и обезьян. Выраженность ЦПД варьирует в зависимости от серотипа и штамма. Вирусы ВПГЧ-1 и ВПГЧ-4 типов наименее цитопатогенны, их определяют в зараженных культурах по реакции гемадсорбции. Парагриппозные вирусы с трудом адаптируются к размножению в куриных эмбрионах.

Патогенез

Парагриппозные инфекции у людей протекают по типу острых респираторных заболеваний. Вирусы парагриппа репродуцируются в эпителиальных клетках слизистой оболочки носоглотки. Затем они проникают в кровь, вызывая вирусемию.

Иммунитет

После перенесения инфекции формируется типоспецифический гуморальный иммунитет, который сохраняется в течение нескольких лет. В сыворотке крови обнаруживаются комплемент-связывающие, вируснейтрализующие, антигемагглютинирующие антитела. Важное значение имеют секреторные антитела SIgA.Вакцинопрофилактика не применяется.Парагрипп может служить причиной внутрибольничных инфекций, особенно среди ослабленных детей. Среди острых респираторных заболеваний парагрипп встречается примерно в 10% случаев.

Парагрипп

Вирусы парагриппа по форме и ультраструктурой подобные гриппозных, но значительно больше по размерам. Диаметр сферических форм - 150-300 нм. Встречаются также грушевидные и ветвистые формы. Вирусы содержат однониточную линейную нефрагментовану "минус" нить РНК. Суперкапсидна оболочка имеет гемагглютинин и нейраминидазу. Вирусы содержат 6-8 структурных белков, среди которых белки нуклеокапсида - HN, Р, L. Особый белок М локализуется между нуклеокапсидом и суперкапсидною оболочкой.Вирусы способны агглютинировать эритроциты гвинейских свинок, кур, обезьян и человека. Культивируются в перевиваемых и первичных культурах клеток человека и обезьян (HeLa, ВНК-21, Vero, Нед-2, СМЦ), но плохо развиваются в куриных эмбрионах. По антигенной строению различают 5 серотипов, вызывающих различные респираторные заболевания: острые фарингиты, ларингиты, трахеобронхит, пневмония, круп. Особенно тяжелое течение заболеваний у детей первого года жизни.

Вирусологическая диагностика

Для вирусологической диагностики парагрипозной инфекции исследуют слизь из задней стенки глотки, нижних носовых ходов, автопсийний материал (ткани трахеи, бронхов, легких). Как правило, материал забирают в первые дни болезни, что связано с высокой концентрацией вирионов в нем. Забор проводят одновременно с помощью 2-3 стерильных ватных тампонов, которые позже погружают в одну пробирку с 5 мл раствора Хэнкса и 5% бычьего сывороточного альбумина или греть бычьей сыворотки крови. Перед последующим выделением вирусов тампоны отжимают и удаляют из пробирки, и после отстаивания отбирают среднюю порцию жидкости для дальнейшего исследования. Присутствующую микрофлору уничтожают добавлением по 500 ЕД / мл пенициллина и стрептомицина, виримуючы пробирки в течение 30 минут при комнатной температуре, и заражают монослоя культур клеток. Материал, который остался, сохраняют некоторое время при температуре -18 ° С для повторного, в случае необходимости, исследования.Доказать наличие вирусов в культурах клеток можно через 2-4 дня по цитопатическим действием. При этом наблюдается образование симпластов с многочисленными ядрами, закругленные контуры клеток, культура приобретает вид твердого сыра (участки отсутствия клеток). С этой целью также широко используется реакция гемадсорбции (РГадс), которую ставят с эритроцитами гвинейских свинок. Начиная с 6-8 дня культивирования вирусов для индикации их в культуре клеток можно использовать РГА с эритроцитами гвинейских свинок.Для типирования парагрипозной вирусов используют РН, РТГА, РСК, РГГАДСи другие. В реакции торможения гемагглютинации используют 0,7% взвесь эритроцитов гвинейских свинок или человека. Следует обратить внимание, что чувствительность реакции повышается ется, если система "вирусмисткий материал - противовирусная диагностическая сыворотка" инкубировать при комнатной температуре в течение 2 ч или 18 ч при 4 ° С. После добавления соответствующих эритроцитов реакцию еще выдерживают при 22 ° С в течение 1 ч и оценивают результаты. Поскольку различные серотипы вирусов парагриппа имеют общие антигены иммунологические реакции ставят, предварительно сделав разводку диагностических сывороток. Серологический тип вируса определяют по самым титром диагностической сыворотки, которая дала положительный результат.Значительное распространение для идентификации вирусов парагриппа РН. в которой результаты оценивают по гемадсорбции. При ее постановке сначала выдерживают смесь инактивированных прогреванием при 56 ° С ЗО мин типоспецифических диагностических сывороток с выделенным вирусом в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем заражают культуры клеток, инкубируя их при 35 ° С 4-5 дней, и добавляют взвесь эритроцитов гвинейских свинок. После инкубации в течение 20 мин при температуре 37 ° С читают результаты. При нейтрализации сывороткой вирусов парагриппа не наблюдается адсорбции эритроцитов на поверхности клеток.

Серологическая диагностика

Серологическая диагностика проводится с парными сыворотками больного, получают соответственно в начале заболевания и двумя неделями позже. В течение этого времени первую сыворотку хранят в холодильнике в замороженном состоянии. Четырехкратный прирост титра антител определяют параллельно в двух рядах пробирок, используя стандартные методики постановки РТГА и РСК.

Экспресс-диагностика

Экспресс-диагностика является достаточно информативным методом, который позволяет определить вирусы в исследуемом материале. С этой целью часть материала, который был получен для вирусологической диагностики, центрифугируют 5-7 мин при 1000 об / мин. Полученный осадок ресуспендируют в 3-5 каплях надосадочной жидкости и готовят из него мазки. их обрабатывают иммунофлуоресцентный сыворотками и исследуют в люминесцентном микроскопе.Наблюдаются цилиндрические или полигональные клетки и закругленной формы лейкоциты. При наличии вирусов в клетках появляется характерное зеленое свечение цитоплазмы отдельных клеток, в то время как клетки, не содержат вирусов, имеют кирпично-красный цвет. Оценить достоверность результатов позволяет изучение контрольных препаратов.К супернатанта, оставшийся добавляют пенициллин и стрептомицин в концентрации 500 МЕ / мл. Через 30 мин инкубации при температуре 18-20 ° С материалом заражают культуры клеток, которые выращиваются заранее на стерильных предметных стеклах, помещенных в пробирки. Культивируют вирусы в таком состоянии 24-72 часов при температуре 35 ° С, а затем стекла с культурой клеток промывают стерильным буферным раствором и высушивают. Для фиксирования используют охлажденный до -20 ° С ацетон (10-20 мин при комнатной температуре), позже стекла высушивают и обрабатывают специфическими иммунофлуоресцентный сыворотками (прямая или косвенная реакция иммунофлюоресценции).Определить незначительное количество вирусов в любом исследуемом материале можно, используя методы генетической диагностики, и. частности, полимеразной цепной реакции.

Инфекционисты в Москве

Рязанцева Марина Александровна 27 отзывов Записаться

Цена: 1700 руб.
Специализации: Гепатология, Инфекционные болезни.

Федосюк Александр Васильевич 58 отзывов Записаться

Цена: 1500 руб. 1350 руб.
Специализации: Гастроэнтерология, Гепатология, Инфекционные болезни.

Мыльцев Андрей Анатольевич 182 отзыва Записаться

Цена: 3500 руб. 2275 руб.
Специализации: Аллергология, Иммунология, Инфекционные болезни.

Инфекционисты в Москве

мы с Вами свяжемся и согласуем время