Вирус гепатита A (HAV)

Возбудитель гепатита A (HAV - Hepatitis A virus) относится к семейству пикорнавирусов, роду энтеровирусов. Вызывает наиболее распространенный вирусный гепатит, который имеет несколько исторических названий (инфекционный, эпидемический гепатит, болезнь Боткина и др.). В нашей стране около 70% случаев вирусного гепатита вызывается вирусом гепатита А. Вирус впервые был обнаружен С. Фейстоуном в 1979 г. в фекалиях больных методом иммунной электронной микроскопии.

Структура и химический состав

По морфологии и структуре вирус гепатита А близок ко всем энтеровирусам. В РНК вируса гепатита А обнаружены нуклеотидные последовательности, общие с другими энтеровирусами. Вирус гепатита А имеет один вирусспецифический антиген белковой природы. HAV отличается от энтеровирусов более высокой устойчивостью к действию физических и химических факторов. Он частично инактивируется при нагревании до 60°С в течение 1 ч, при 100°С разрушается в течение 5 мин., чувствителен к действию формалина и УФ-излучению.

Культивирование и репродукция

Вирус гепатита обладает пониженной способностью к репродукции в культурах клеток. Однако его удалось адаптировать к перевиваемым линиям клеток человека и обезьян. Репродукция вируса в культуре клеток не сопровождается ЦПД. HAV почти не выявляется в культуральной жидкости, поскольку ассоциирован с клетками, в цитоплазме которых он репродуцируется.

Патогенез и иммунитет

HAV так же, как и другие энтеро-вирусы, с пищей попадает в желудочно-кишечный тракт, где репродуцируется в эпителиальных клетках слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфатических узлах. Затем возбудитель проникает в кровь, в которой он обнаруживается в конце инкубационного периода и в первые дни заболевания. В отличие от других энтеровирусов основной мишенью поражающего действия HAV являются клетки печени, в цитоплазме которых происходит его репродукция. Не исключена возможность поражения гепатоцитов NK-клетками (натуральными киллерами), которые в активированном состоянии могут взаимодействовать с ними, вызывая их разрушение. Активация NK-клеток происходит и в результате их взаимодействия с интерфероном, индуцированным вирусом. Поражение гепатоцитов сопровождается развитием желтухи и повышением уровня трансаминаз в сыворотке крови. Далее возбудитель с желчью попадает в просвет двенадцатиперстной и тонкой кишки и выделяется с фекалиями, в которых отмечается высокая концентрация вируса в конце инкубационного периода и в первые дни заболевания (до развития желтухи). Гепатит А обычно заканчивается полным выздоровлением, летальные исходы редки. После перенесения клинически выраженной или бессимптомной инфекции формируется пожизненный гуморальный иммунитет, связанный с синтезом противовирусных антител. Иммуноглобулины класса IgM исчезают из сыворотки через 3-4 мес. после начала заболевания, в то время как IgG сохраняются в течение многих лет. Установлен также синтез секреторных иммуноглобулинов SIgA.

Эпидемиология

Источником инфекции являются больные люди, в том числе и с распространенной бессимптомной формой инфекции. Вирус гепатита А широко циркулирует среди населения. На Европейском континенте сывороточные антитела против HAV содержатся у 80% взрослого населения, достигшего 40-летнего возраста. В странах с низким социально-экономическим уровнем инфицирование происходит уже в первые годы жизни. Гепатитом А часто болеют дети. Больной наиболее опасен для окружающих в конце инкубационного периода и в первые дни разгара болезни (до появления желтухи) в связи с максимальным выделением вируса с фекалиями. Основной механизм передачи - фекально-оральный - через пищу, воду, предметы обихода, детские игрушки.

Гепатит А

Возбудитель эпидемического гепатита А принадлежат к семейству Picornaviridae, рода Hepatovirus, типа 72. Он имеет сферическую форму, кубический тип симметрии, диаметр зрелого вириона - 27-32 нм. В центре вириона находится однониточная линейная плюснитка РНК. Поверхность капсида создается 32 отдельных капсомерами, поверхностных выступлений нет. Вирусы имеют четыре структурных белки - VP1, VP2, VP3, VP4. От других энтеровирусов вирус гепатита А отличается более высокой резистентностью к действию факторов внешней среды. В частности, он частично сохраняет свою инфекционность в культуре клеток при 60 ° С в течение 4-12 ч, неделями при комнатной температуре в течение нескольких месяцев при 4 ° С. Ультрафиолетовое излучение уничтожает его за 1 мин, при автоклава ванне (121 ° С) - за 20 мин, воздействие сухого жара (180 ° С) - за один час. Вирус чувствителен к формалина, хлорамина, хлорной извести. С целью лабораторной диагностики используют вирусологические, серологические и экспресс-методы.

Вирусологическая диагностика

Вирусологическая диагностика основана на выявлении самого возбудителя или его антигенов после накопления его в специальных тест-системах. Материалом для такого исследования являются фекалии больного, которые можно использовать, начиная со второй недели инкубационного периода и в течение 14-21 дня желтушного периода. их подвергают предварительной подготовке, которая заключается в получении гомогенизированный в фосфатном буфере 10-40% фекального экстракта. Во время этого процесса вирусы концентрируют, используя фильтрацию материала через сефароза, а также центрифугирования по градиенту плотности хлорида цезия. Полученным материалом заражают культуры клеток почек эмбриона макакрезус (FrhK-4, FrhK-6), первичной гепатоцеллюлярной карциномы, лимфобластов человека и другие. Следует отметить, что вирусам гепатита А характерен длинный цикл репродукции, который длится 4-10 недель без заметного цитопатического действия. В клетках зараженных вирусы или их антигены можно обнаружить с помощью иммунной электронной микроскопии (ИЭМ), РИФ, Р1А, ИФА. Иммунная электронная микроскопия предусматривает смешивание суспензии вирусов с соответствующей антисывороткой, отделение иммунных комплексов с последующим исследованием последних под электронным микроскопом. В условиях негативного контрастирования можно обнаружить агрегаты вирусов при концентрации менее 106 в 1 г материала. Однако в связи с большой трудоемкостью, этот метод в практических лабораториях не используется.

Реакция иммунофлюоресценции

Реакцию иммунофлюоресценции можно использовать и при исследовании биоптатов печени. При прямой иммунофлюоресценции пользуются меченым флуоресцеинизотиоцианатом IgG, выделенным из сывороток реконвалесцентов. Ценность метода заключается в том, что он позволяет найти отдельные клетки, содержащие антиген. Радиоиммунный и иммуноферментный анализы в твердой фазе Эти методы распространенные в диагностике, имеют одинаковую высокую чувствительность и специфичность. Они имеют один и тот же принцип постановки с той разницей, что в РИА используют специфические иммуноглобулины (IgG), меченые 125И, а в ИФА - ферментом пероксидазой. Наличие вирусов в фекалиях является 100% подтверждением диагноза, однако их отсутствие по данным серологических реакций не исключает гепатит А. В отдельных случаях материалом от больного можно заражать лабораторных животных. Чаще всего в высокоспециализированных лабораториях используют обезьян шимпанзе, мармозет, павианов и других. Позже в материале от животных обнаруживают вирусы гепатита А или его антигены вышеописанными способами.

Экспресс-диагностика

Экспресс-диагностика гепатита А направленная на непосредственное определение вирусов в испражнениях больного. С этой целью используют современные методы иммунной электронной микроскопии, радиоиммунный анализ, реакцию ензиммичених антител. Последний является достаточно чувствительным и эффективным. Генетический анализ базируется на ПЦР.

Серологическое исследование

Одним из способов доказательства этиологической принадлежности выделенного от больных вируса является обнаружение в парных сыворотках крови роста тнтру специфических антител. При заболевании антитела появляются рано, их синтез начинается еще в инкубационном периоде, а титр резко возрастает. В связи с поздним поступлением больных в стационар четырехкратное диагностическое увеличение титра антител выявить практически невозможно. Поэтому этот метод диагностики не нашел широкого применения. Антитела против вируса гепатита А в инкубационном периоде и в начале острой фазы заболевания представлены классом IgM. Постепенно снижаясь в титре, они циркулируют в течение 6-8, а порой и 12-18 месяцев. Анти-ВГА IgM синтезируются у всех больных, независимо от формы инфекции. Нахождение их - ранний тест диагностики, который позволяет не только подтвердить или опровергнуть клинический диагноз, но и выявить стертые, бессимптомные формы заболевания, что имеет решающее значение в епидемиологичих исследованиях. В дальнейшем их замещающим IgG. Иммуноглобулины класса М можно найти в крови в течение 3-6 месяцев после перенесенного заболевания, в то время как IgG - в течение всей жизни. Антитела выявляют с помощью РИА или ИФА. Кроме определения анти-ВГА IgM, для диагностики в остром периоде заболевания в сыворотке обнаруживают анти-ВГА IgA, которые также являются ранними антителами и растут параллельно с IgM, однако снижение их титра происходит значительно быстрее. Секреторные анти-ВГА IgA найдены также в фекалиях. Чаще всего для определения титра антител используют ИФА, РИА, порой - РСК.

Новости по теме:

О положительных результатах своей работы сообщают ученые компании Gilead Sciences. Разработанный ими экспериментальный препарат, согласно результатам практически завершившихся исследований, позволяет проводить терапию любого типа гепатита С с одинаковой эффективностью. Как пояснили авторы проекта, на данный момент на стадии своего
Опасная находка была обнаружена в вечной мерзлоте на крайних северных территориях Российской Федерации. Здесь, в снегу и льдах, за последнюю дюжину лет ученые нашли уже четвертый вирус. Аналогичная находка была задокументирована в 2003 году. Древние вирусы представляют для исследователей огромный интерес, но могут нести в себе опасность