Трипаносомоз

Трипаносомоз - протозойные трансмиссивные болезни людей и животных, которые вызывают жгутиковые простейшие - трипаносомы. У людей встречаются две формы трипаносомоз: африканский (сонная болезнь) и американский (болезнь Шагаса-Крузе). Возбудителями африканского трипаносомоза является Trypanosoma gambiense и более вирулентная Trypanosoma rhodesiense. Заболевание характеризуется лихорадкой, высыпаниями на коже, отеками, увеличением лимфатических узлов, поражением центральной нервной системы (сонливость) и другими симптомами. Источником инфекции в природе человек (Т gambiense) и антилопа гну (Т rhodesiense), переносчик - муха цеце. Возбудителем американского трипанозомозу является Trypanosoma cruzi. Болезнь характеризуется лихорадкой, первичным аффектом на коже, поражением кишечника (мегаколон), сердца, печени, селезенки и центральной нервной системы, у детей имеет острое течение, у взрослых - преимущественно хроническое. Резервуар инфекции - больные люди, крысы, кошки, собаки, броненосцы, переносчик - триатомовые (поцелуе) клопы. Все три вида трипаносом морфологически сходные между собой. Материалом для исследования служит кровь, спинномозговая жидкость, пункгаты костного мозга и лимфоузлов, кусочки пораженных тканей. Для лабораторной диагностики используют микроскопический, биологический и серологический методы. Важно сделать люмбальную пункцию для обнаружения трипаносом в ликворе и распознавания природы поражений центральной нервной системы. В начальной стадии болезни возбудителя можно обнаружить в крови и месте укусов (Т. rhodesiense) или в шейных лимфатических узлах (Т. gambiense).

Микроскопическое исследование

Из крови делают нативный препарат надавленные капли, тонкий мазок и толстую каплю. Во всех препаратах легко увидеть трипаносомы, которые располагаются внеклеточно. В нативном препарате при уменьшении интенсивности освещения видно подвижные паразиты. В фиксированных мазках, окрашенных по методу Романовского-Гимза, четко видно голубую цитоплазму и продолговато-овальные красно-фиолетовое ядро, расположенное в центре возбудителя. Размеры трипаносом составляют 17-30 мкм в длину и 1,5-2,0 мкм в ширину. На заднем конце тела видно блефаропласт, от которого отходит жгутик, волнообразно изгибается у наружной оболочки трипаносомы и направляются к ее переднего конца, где он немного свободно выступает. Между телом трипаносомы и жгутиком расположена ундулююча мембрана. Если в исследуемом материале трипаносом не проявляют, употребляют метод обогащения. Для этого 10 мл цитратной крови центрифугируют 10 мин при 1500 об / мин, отсасывают плазму, а из осадка готовят препараты, которые исследуют в нативном и окрашенном виде. Плазму повторно центрифугируют в течение 20 мин и из осадка готовят мазки, фиксируют метанолом и окрашивают по методу Романовского-Гимза. Так же окрашивают мазки из ликвора, пунктатов лимфоузлов и костного мозга. Следует помнить, что при поражении центральной нервной системы трипаносомы в крови и пунктатах лимфатических узлов не обнаруживаются. У больных острой формой американского трипаносомоза паразиты довольно легко обнаруживают в нативных и окрашенных препаратах. При хронических формах заболевания трипаносомы в периферической крови или вовсе не находят, или их обнаруживают единичными очень редко при просмотре многих полей зрения. Чаще их можно увидеть при применении метода обогащения, как и при сонной болезни. В некоторых случаях эффективным методом выявления Т. cruzi является ксенодиагностика. Несколько выращенных в лаборатории триатомовыми клопов, свободных от трипаносом, высаживают на кожу больного, чтобы они насмоктались крови с паразитами. Затем через 5 дней трипаносомы легко выявляют путем микроскопии экскрементов инфицированных клопов.

Паразитарное и биологическое исследование

Патогенные трипаносомы всех трех видов можно культивировать на искусственных питательных средах для простейших. Чтобы выделить чистые культуры трипаносом от больных, делают посевы крови или пункгатив лимфатических узлов или костного мозга. Для этого чаще всего используют arapNNN (Novy-Neal-Nicolle), содержащий дефибринированной крови кролика, среда Вейман (кровяной агар с цитратной плазмы крови человека) и др.. Посевы инкубируют при температуре 22-26 ° С. Характерны маленькие и прозрачные колонии вырастают на 3-4-й день после посева. Чистые культуры трипаносом получают также в куриных эмбрионах (инокулюючы материал в хорионалантоисну оболочку), или в культурах эмбриональных тканей крыс или клеток Неиа. Культуральный метод диагностики используют редко, виннятком болезни Шагаса-Крузе. Для диагностики трипаносомоз можно использовать постановку биологической пробы на различных экспериментальных животных. При американском варианте болезни вводят 5-10 мл крови интраперитонеально гвинейским свинкам, котятам или щенкам. Через несколько дней в крови зараженных животных появляются трипаносомы. К Т. gambiense особенно чувствительны обезьяны рода Eiythrocebus, а к Т. rhodesiense - белые мыши и крысы. При диагностике африканского трипаносомоза важно не только установить вид возбудителя, но и стадию болезни. Для этого исследуют спинномозговую жидкость на содержание белка и число лимфоцитов. К первой (ранней) стадии относят те случаи, когда количество белка не первищуе 250 мг / мл, а число клеток не более 3-х в 1 мл. Более высокое содержание белка и лимфоцитов свидетельствует о тяжелом поражении центральной нервной системы, а, следовательно, о второй (поздний) стадии болезни.

Серологические реакции

Серологические реакции более детально разработаны для диагностики американского трипаносомоза. Но теперь уже предложены методы определения антител классов IgM и IgG в диагностических титрах у всех больных трипаносомоз. Для этой цели используют реакции преципитации, агглютинации, иммунофлюоресценции и связывания комплемента. Антигеном для их постановки служит экстракт из сердечных мышц инвазированных животных или живых трипаносом. Реакции агглютинации и преципитации используют при острых формах болезни, а РСК - при хронических. Результаты реакций лучше оценивать при постановке методом парных сывороток. В последнее время разработаны специфический и чувствительный метод диагностики с помощью ензиммичених антител. Антигеном для ИФА служат лизаты трипаносом от зараженных животных или лабораторных культур.