Мочеполовой хламидиоз

Мочеполовой хламидиоз

Патогенные хламидии, особенно С. trachomatis, довольно часто вызывают острые или хронические воспаления уретры, влагалища, шейки матки. Урогенитальный хламидиоз протяжении последнего десятилетия встречается чаще, чем сифилис и гонорея. Основной путь передачи заболевания - половой, реже - бытовой. Материалом для лабораторного исследования служат соскобы со слизистой уретры у мужчин и женщин и соскобы с шейки матки у женщин. Украинских НД1 дерматологии и венерологии разработал унифицированные методы диагностики мочеполовых хламидиозов. Среди них важное значение имеют экспресс-методы, выявление морфологических структур и антигенов хламидий в исследуемом материале, выделение хламидий в культурах клеток, выявление хламидийных антител с помощью серологических реакций и полимеразная цепная реакция.

Экспресс-методы

Ряд фирм СЕЛА и Франции разработали специальные диагностические тесты для проведения имунохроматографичных экспресс-методов, которые могут выдать результат через 10-30 мин. Однако их чувствительность и специфичность значительно меньше, чем при проведении полномасштабных исследований.

Микроскопические методы

Исследуемый материал берут у больных, которые в течение месяца не должны принимать антибиотики. Соскобы делают одноразовым зондом (щеточкой, ложечкой Фолькмана, жолобкуватим зондом). Инфекционный материал наносят на поверхность 8 мм ямки специального предметного стекла. Мазок высушивают 20-30 мин и фиксируют в холодном ацетоне в течение 5-10 мин, окрашивают по методу Романовского-Гимза 35-40 мин, обрабатывают подкисленным этанолом (3-5 капель ледяной уксусной кислоты на 15-20 мл спирта) в течение 5-10 с, промывают водой, высушивают и микроскопируют. Ретикулярные тельца окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, а элементарные тельца - в розово-красный. Зернистые структуры хламидий располагаются вблизи ядра. Выявление 5-10 типичных включений имеет диагностическое значение. Антигены хламидий в инфекционном материале обнаруживают с помощью прямой и непрямой реакции иммунофлюоресценции. Суть прямого метода заключается в соединении меченных флуорохромом антител с хламидийным антигеном и выявлении специфического свечения при люминесцентной микроскопии. Люминесцентная антихламидийну сыворотка производится в Харькове. Есть много иностранных диагностических систем для проведения этого метода. Суть косвенного метода заключается в соединении комплекса антиген + немеченых хламидийные антитела с видовой (антиглобулиновою) меченой флуоресцеин сывороткой. Кроме микроскопических методов, антигены хламидий в инфекционном материале можно обнаружить с помощью иммуноферментного анализа. Принцип метода заключается во взаимодействии моноклональных хламидийных антител, адсорбированных на твердой фазе, с антигеном хламидий, находящегося в исследуемом материале, и образовании иммунных комплексов. Материалом для анализа могут быть соскобы со слизистых оболочек, центрифугат моче, секретах, биоптаты подобное. Уже разработаны и внедрены в практику много диагностических тест-систем для ИФА. Исследуемый материал вносят на адсорбированные в лунках планшеты антитела. Оценка результатов проводится с помощью иммуноферментного анализатора согласно инструкции к каждой тест-системы. Чувствительность ИФА для выявления хламидий колеблется в пределах 50-70% у мужчин и 88-100% у женщин.

Выделение хламидий в культурах клеток

Наиболее точным и доказательным методом диагностики хламидиоза является выделение возбудителя на культуре клеток (золотой стандарт). Чаще всего используют культуры клеток L-929, McCoy, Hela, ВНК-21. В стерильные плоскодонные пробирки диаметром 14 мм вносят на дно покрывных стекла, добавляют по 1 мл клеточной суспензии в питательной среде (1-Ю5 клеток / мл) и ставят на 24-48 ч в термостат при 37 ° С для образования монослоя клеток на покрывных стеклах . Затем среду выливают, вносят инфекционный материал, обработанный антибиотиками, центрифугированные течение часа при 3000 об / мин, инкубируют в термостате 2 часа при 37 ° С. Исследуемый материал выливают, заменяют его свежим питательной средой, инкубируют в термостате 48-72 час. Покрывных стекла с монослоем клеток вынимают, фиксируют 10 мин метанолом, промывают фосфатным буфером и окрашивают по методу Романовского-Гимза. Покрывных стекла монтируют на предметном стекле монослоем клеток вниз в канадском бальзаме. Во иммерсионным объективом выявляют наличие цитоплазматических включений. Элементарные тельца хламидий окрашиваются в красный, а ретикулярные тельца - в синий цвет. При обработке препаратов флуоресцентными антителами монослой клеток также монтируют на предметном стекле в глицерине и исследуют с помощью люминесцентного микроскопа. Метод высокоспецифичным (100%) и чувствительный (75%), но достаточно сложный, дорогой, результат получают через 72-96 час. Кроме того, велик риск заражения персонала. Для практических лабораторий он еще малодоступен.

Иммунологическая диагностика

В современной практике серологических исследований мочеполовых хламидиозов используют 4 иммунологические реакции: непрямой иммунофлюоресценции, непрямой гемагглютинации, связывания комплемента и метод иммуноферментного анализа. Материалом для исследования во всех 4-х реакциях является сыворотка крови больных, секреты половых желез. С целью выявления хламидийных антител в реакции непрямой иммунофлюоресценции применяют специфический хламидийный антиген, который обеспечивает реакции с антителами ко всем вариантам С. trachomatis. При постановке этой реакции на предметном стекле готовят слайд-антигены. Стекло помещают на трафарет с указанием зон нанесения антигенов (контрольного и специфического). Слайды высушивают 15-20 мин и фиксируют в охлажденном ацетоне. Затем на слайд-антигены наносят соответствующие разведения сыворотки, инкубируют 40 мин при 37 ° С во влажной камере. После этого препарат трижды промывают фосфатным буферным раствором, добавляют антивидовой люминесцирующих сыворотку еще раз выдерживают 40 мин во влажной камере и снова трижды промывают. Высушенные слайды исследуют под люминесцентным микроскопом. Технику постановки реакции выполняют инструкции, прилагаемой к каждой диагностической тест-системы. Оценку результатов проводят по степени специфической флуоресценции комплексов элементарных и ретикулярных телец с антителами, используя классическую чотириплюсову систему. Титром хламидийных антител сыворотки больного считают то больше ее разведения, при котором наблюдается четкое ярко-зеленое свечение не менее, чем на 2 +. При хламидийных поражениях мочеполовой системы он равен 1:64 и выше. Постановка РИФ методом парных сывороток должна выявить нарастание титра антител в 4 раза от исходного уровня. Рекцию непрямой гемагглютинации используют, в основном, для диагностики зоонозных хламиде иозив и первичного серологического скрининга заболеваний у людей. Реакция связывания комплемента позволяет выявить антитела к родоспецифичного антигена хламидий. Ставят ее по обычной схеме. Диагноз считают положительным при титре комплементсвязывающих антител 1:64 и выше. РСК мало подходит для диагностики хламидийных инфекций генитальной системы. Выявление хламидийных антител иммуноферментным методом базируется на взаимодействии антигена с хламидий на поверхности лунок полистирилових планшет с IgM и IgG в сыворотках больных людей. Уже изготовлена большое количество диагностических наборов. Сначала сыворотку больного разводят во вспомогательном ряду пробирок, затем проводят сорбцию антител в лунках микротитровального планшета. Подробная методика постановки ИФА изложена в инструкции, прилагаемой к диагностической тест-системы. ИФА рекомендуют ставить с помощью парных сывороток. Оценку результатов осуществляют с помощью иммуноферментного анализатора по величине оптической плотности растворов в лунках полистирилового планшета.