vse-zabolevaniya.ru Подберем лучшего врача в Москве
звоните: 7 (499) 116-78-36
ГлавнаяМикробиологияМочеполовой хламидиоз

Мочеполовой хламидиоз

ссылки

Мочеполовой хламидиоз

Патогенные хламидии, особенно С. trachomatis, довольно часто вызывают острые или хронические воспаления уретры, влагалища, шейки матки. Урогенитальный хламидиоз протяжении последнего десятилетия встречается чаще, чем сифилис и гонорея. Основной путь передачи заболевания - половой, реже - бытовой.Материалом для лабораторного исследования служат соскобы со слизистой уретры у мужчин и женщин и соскобы с шейки матки у женщин. Украинских НД1 дерматологии и венерологии разработал унифицированные методы диагностики мочеполовых хламидиозов. Среди них важное значение имеют экспресс-методы, выявление морфологических структур и антигенов хламидий в исследуемом материале, выделение хламидий в культурах клеток, выявление хламидийных антител с помощью серологических реакций и полимеразная цепная реакция.

Экспресс-методы

Ряд фирм СЕЛА и Франции разработали специальные диагностические тесты для проведения имунохроматографичных экспресс-методов, которые могут выдать результат через 10-30 мин. Однако их чувствительность и специфичность значительно меньше, чем при проведении полномасштабных исследований.

Микроскопические методы

Исследуемый материал берут у больных, которые в течение месяца не должны принимать антибиотики. Соскобы делают одноразовым зондом (щеточкой, ложечкой Фолькмана, жолобкуватим зондом). Инфекционный материал наносят на поверхность 8 мм ямки специального предметного стекла. Мазок высушивают 20-30 мин и фиксируют в холодном ацетоне в течение 5-10 мин, окрашивают по методу Романовского-Гимза 35-40 мин, обрабатывают подкисленным этанолом (3-5 капель ледяной уксусной кислоты на 15-20 мл спирта) в течение 5-10 с, промывают водой, высушивают и микроскопируют. Ретикулярные тельца окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, а элементарные тельца - в розово-красный. Зернистые структуры хламидий располагаются вблизи ядра. Выявление 5-10 типичных включений имеет диагностическое значение.Антигены хламидий в инфекционном материале обнаруживают с помощью прямой и непрямой реакции иммунофлюоресценции. Суть прямого метода заключается в соединении меченных флуорохромом антител с хламидийным антигеном и выявлении специфического свечения при люминесцентной микроскопии. Люминесцентная антихламидийну сыворотка производится в Харькове. Есть много иностранных диагностических систем для проведения этого метода.Суть косвенного метода заключается в соединении комплекса антиген + немеченых хламидийные антитела с видовой (антиглобулиновою) меченой флуоресцеин сывороткой.Кроме микроскопических методов, антигены хламидий в инфекционном материале можно обнаружить с помощью иммуноферментного анализа. Принцип метода заключается во взаимодействии моноклональных хламидийных антител, адсорбированных на твердой фазе, с антигеном хламидий, находящегося в исследуемом материале, и образовании иммунных комплексов. Материалом для анализа могут быть соскобы со слизистых оболочек, центрифугат моче, секретах, биоптаты подобное.Уже разработаны и внедрены в практику много диагностических тест-систем для ИФА. Исследуемый материал вносят на адсорбированные в лунках планшеты антитела. Оценка результатов проводится с помощью иммуноферментного анализатора согласно инструкции к каждой тест-системы. Чувствительность ИФА для выявления хламидий колеблется в пределах 50-70% у мужчин и 88-100% у женщин.

Выделение хламидий в культурах клеток

Наиболее точным и доказательным методом диагностики хламидиоза является выделение возбудителя на культуре клеток (золотой стандарт). Чаще всего используют культуры клеток L-929, McCoy, Hela, ВНК-21. В стерильные плоскодонные пробирки диаметром 14 мм вносят на дно покрывных стекла, добавляют по 1 мл клеточной суспензии в питательной среде (1-Ю5 клеток / мл) и ставят на 24-48 ч в термостат при 37 ° С для образования монослоя клеток на покрывных стеклах . Затем среду выливают, вносят инфекционный материал, обработанный антибиотиками, центрифугированные течение часа при 3000 об / мин, инкубируют в термостате 2 часа при 37 ° С. Исследуемый материал выливают, заменяют его свежим питательной средой, инкубируют в термостате 48-72 час. Покрывных стекла с монослоем клеток вынимают, фиксируют 10 мин метанолом, промывают фосфатным буфером и окрашивают по методу Романовского-Гимза. Покрывных стекла монтируют на предметном стекле монослоем клеток вниз в канадском бальзаме.Во иммерсионным объективом выявляют наличие цитоплазматических включений. Элементарные тельца хламидий окрашиваются в красный, а ретикулярные тельца - в синий цвет.При обработке препаратов флуоресцентными антителами монослой клеток также монтируют на предметном стекле в глицерине и исследуют с помощью люминесцентного микроскопа. Метод высокоспецифичным (100%) и чувствительный (75%), но достаточно сложный, дорогой, результат получают через 72-96 час. Кроме того, велик риск заражения персонала. Для практических лабораторий он еще малодоступен.

Иммунологическая диагностика

В современной практике серологических исследований мочеполовых хламидиозов используют 4 иммунологические реакции: непрямой иммунофлюоресценции, непрямой гемагглютинации, связывания комплемента и метод иммуноферментного анализа. Материалом для исследования во всех 4-х реакциях является сыворотка крови больных, секреты половых желез.С целью выявления хламидийных антител в реакции непрямой иммунофлюоресценции применяют специфический хламидийный антиген, который обеспечивает реакции с антителами ко всем вариантам С. trachomatis.При постановке этой реакции на предметном стекле готовят слайд-антигены. Стекло помещают на трафарет с указанием зон нанесения антигенов (контрольного и специфического). Слайды высушивают 15-20 мин и фиксируют в охлажденном ацетоне. Затем на слайд-антигены наносят соответствующие разведения сыворотки, инкубируют 40 мин при 37 ° С во влажной камере. После этого препарат трижды промывают фосфатным буферным раствором, добавляют антивидовой люминесцирующих сыворотку еще раз выдерживают 40 мин во влажной камере и снова трижды промывают. Высушенные слайды исследуют под люминесцентным микроскопом. Технику постановки реакции выполняют инструкции, прилагаемой к каждой диагностической тест-системы.Оценку результатов проводят по степени специфической флуоресценции комплексов элементарных и ретикулярных телец с антителами, используя классическую чотириплюсову систему. Титром хламидийных антител сыворотки больного считают то больше ее разведения, при котором наблюдается четкое ярко-зеленое свечение не менее, чем на 2 +. При хламидийных поражениях мочеполовой системы он равен 1:64 и выше. Постановка РИФ методом парных сывороток должна выявить нарастание титра антител в 4 раза от исходного уровня.Рекцию непрямой гемагглютинации используют, в основном, для диагностики зоонозных хламиде иозив и первичного серологического скрининга заболеваний у людей.Реакция связывания комплемента позволяет выявить антитела к родоспецифичного антигена хламидий. Ставят ее по обычной схеме. Диагноз считают положительным при титре комплементсвязывающих антител 1:64 и выше. РСК мало подходит для диагностики хламидийных инфекций генитальной системы.Выявление хламидийных антител иммуноферментным методом базируется на взаимодействии антигена с хламидий на поверхности лунок полистирилових планшет с IgM и IgG в сыворотках больных людей. Уже изготовлена большое количество диагностических наборов.Сначала сыворотку больного разводят во вспомогательном ряду пробирок, затем проводят сорбцию антител в лунках микротитровального планшета. Подробная методика постановки ИФА изложена в инструкции, прилагаемой к диагностической тест-системы. ИФА рекомендуют ставить с помощью парных сывороток. Оценку результатов осуществляют с помощью иммуноферментного анализатора по величине оптической плотности растворов в лунках полистирилового планшета.

Инфекционисты в Москве

Рязанцева Марина Александровна 27 отзывов Записаться

Цена: 1700 руб.
Специализации: Гепатология, Инфекционные болезни.

Федосюк Александр Васильевич 58 отзывов Записаться

Цена: 1500 руб. 1350 руб.
Специализации: Гастроэнтерология, Гепатология, Инфекционные болезни.

Мыльцев Андрей Анатольевич 182 отзыва Записаться

Цена: 3500 руб. 2275 руб.
Специализации: Аллергология, Иммунология, Инфекционные болезни.

Инфекционисты в Москве

мы с Вами свяжемся и согласуем время