vse-zabolevaniya.ru
ГлавнаяМикробиологияЛептоспиры и лептоспироз

Лептоспиры и лептоспироз

ссылки

Лептоспиры

К роду Leptospira относятся свыше десяти видов, из которых только один - L. interrogans - патогенен для человека. Возбудитель изучен в 1925 г. А. Инадой с соавт.

Морфология и физиология

Гибкие спиралевидные клетки, слабо-окрашивающиеся анилиновыми красителями, грамотрицательны. Хорошо заметны в темном поле и при фазово-контрастной микроскопии. Один или оба конца клетки загнуты в виде крючков. На обоих концах имеются по одному периплазматическому жгутику. В жидкой среде видны характерные движения клеток как вращение то в одну, то в другую сторону вокруг длинной оси и поступательное движение вперед. Для размножения нуждаются в присутствии в среде сыворотки крови. Аэробы. Хемоорганотрофы, использующие в качестве источника углерода и энергии жирные кислоты. Углеводы и аминокислоты не используют.

Антигены

L.interrogans на основании их антигенного различия дифференцируются на многочисленные в темном поле зрения серогруппы и серовары.

Патогенность и патогенез

К факторам вирулентности L. interrogans относятся способность к инвазии, устойчивость к фагоцитозу. Их длительная персистенция приводит к повреждению эндотелиальных клеток и появлению геморрагии, а также очагов некроза в печени. Липогликопротеид клеточной стенки синтезируется в избытке и включается в цитоплазматическую мембрану клеток хозяина. Лептоспиры проникают в организм человека через слизистые оболочки и поврежденную кожу. Затем по лимфатическим путям попадают в кровь и в паренхиматозные органы. Для лептоспироза наиболее характерно поражение печени, развитие желтухи. Могут поражаться почки, лептоспиры также обнаруживаются в селезенке, костном мозге, лимфатических узлах. Болезнь чаще всего претерпевает обратное развитие и заканчивается выздоровлением.

Иммунитет

При лептоспирозе имеет место гуморальный иммунный ответ. Постинфекционный иммунитет связан с антителами, которые сохраняются в течение многих лет. Однако иммунитет носит специфический характер, вследствие чего могут возникнуть повторные заболевания, вызванные другими сероварами лептоспир.

Экология и эпидемиология

Лептоспиры широко распространены в природе. Сапрофитные лептоспиры встречаются в водоемах, почве, иле и других объектах окружающей среды. Патогенные лептоспиры поражают многие виды животных и в первую очередь грызунов (полевки, крысы, песчанки, хомяки и др.). Лептоспироз - зоонозная инфекция. Она может протекать у животных в хронической форме с выделением их с мочой. Заражение человека происходит, главным образом, через воду и пищу (молоко, мясо, хлеб), инфицированную больными грызунами. В воде и почве лептоспиры сохраняют жизнеспособность в течение 2-3 недель, в пищевых продуктах - несколько дней.

Лептоспироз

Лептоспироз (водная лихорадка) - острая зоонозная естественно-очаговая инфекционная болезнь, вызываемая лептоспирами и сопровождается лихорадкой, поражением почек, печени, сердечно-сосудистой и нервной систем, в тяжелых случаях желтухой и геморрагиями.Все патогенные лептоспиры объединены в один вид Leptospira interrogans, а сапрофитные-в L. biflexa. Теперь известно более 200 сероваров лептоспир, которые составляют 38 серогруппы. На территории Украины выделяют 13 сероваров, из которых заболевание чаще вызывают Leptospira incterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa, L. hebdomadis, L. canicova, L. pomona.Резервуаром и источником возбудителя в природе являются дикие грызуны (мыши, полевки, ондатры) и домашние животные (свиньи, коровы, козы, лошади, собаки). Заражение людей происходит через воду, контаминированные мочой больных животных и носителей, или при уходе за больным скотом.Для лабораторной диагностики лептоспироза используют микроскопический, бактериологический, биологический и серологический методы исследования.

Взятие и доставка исследуемого материала

. От больного берут кровь, мочу, бронхолегочном смывы, спинномозговую жидкость (при наличии менингеальных симптомов) от трупов - кровь, ликвор, гомогенаты внутренних органов. По эпидемиологическим показаниям исследуют воду, пищевые продукты, грызунов на лептоспироносийство, мочу домашних животных. В первые дни заболевания, когда есть лихорадочный период, для посева, постановки биопробы и первичной бактериоскопии берут кровь, на 10-16-й день болезни - мочу и ликвор, на 5-15-ый день - исследуют сыворотку крови на выявление протилептоспирозних антител. Выделение чистых культур и заражение животных проводят в режимных лабораториях, куда материалы доставляют с большими предосторожностями специальным нарочным. В обычных микробиологических лабораториях проводят только бактериоскопические и серологические исследования.

Микроскопический метод

Лептоспиры плохо окрашиваются анилиновыми красками, так исследуют живые микроорганизмы в препаратах "надавленные капли" с помощью темнопольного микроскопа с использованием сухого объектива (40х). Венозную кровь в объеме 2 мл смешивают с 2-мя мл 2% раствора цитрата натрия. Полученную плазму центрифугируют ЗО мин при 3000 об / мин. Мочу, спинномозговую жидкость и взвесь паренхиматозных органов центрифугируют в течение 2-х часов при 4000 об / мин. Пастеровской пипеткой или бактериологической петлей наносят каплю осадка на тонкое предметное стекло (1-1,1 мм), накрывают покрывных стеклом. На верхнюю линзу темнопольного конденсора наносят каплю дистиллированной воды, на которую кладут препарат "надавленные капли".При микроскопии обнаруживают тонкие подвижные лептоспиры с мелкими завитками и характерными заворотами на концах, что придает им вид буквы S. Чтобы предотвратить диагностическим ошибкам, необходимо помнить, что некоторые артефакты (нити фибрина, оболочки эритроцитов), которые напоминают лептоспир, не имеют самостоятельного движения. Выявить возбудителей лептоспироза с помощью микроскопии можно только в свежем исследуемом материале.Чувствительность бактериоскопического метода - 106 клеток / мл. Количество микроорганизмов в крови больных при лептоспиремии не превышает 104-106клитин/мл, поэтому диагностическая ценность этого метода недостаточна для обнаружения возбудителей на ранних стадиях болезни. Надежные результаты дает метод иммунофлюоресценции с использованием специфических люминесцентных сывороток.Если невозможно применить метод прямой микроскопии нативных материалов, можно прибегнуть к окраске фиксированных мазков по Романовскому-Гимзе или негативного контрастирования конто красным. Однако после такой обработки морфология лептоспир меняется, что может привести к ошибочным оценкам.

Бактериологический метод

Классический метод выделения чистых культур лептоспир требует сложных питательных сред и много времени - до 1-2-х месяцев. Используют жидкие среды Фервольта-Вольфа, Уленгута, Терских, основным компонентом которых является инактивированная кроличья сыворотка.Кровь, мочу, спинномозговую жидкость сеют по 10-20 капель в 3-5 пробирок со средой. Посевы инкубируют при температуре 28-30 ° С. Лептоспиры размножаются очень медленно и вызывают помутнение среды. Поэтому для выявления их роста через 7-10 дней инкубации из каждой пробирки производят препарат "надавленные капли" и микроскопируют в темном поле. Если рост лептоспир не проявляют, посевы продолжают выращивать в термостате и микроскопируют через каждые 7-10 дней. При отсутствии роста в течение 3-х месяцев выдают отрицательный результат.При обнаружении лептоспир в любой пробирке необходимо сделать пересел на свежий среду для сохранения культуры с целью его идентификации.Установление вида и серовару лептоспир проводят с помощью реакции агглютинации и лизиса с типичными диагностическими сыворотками. Частота выделения культур колеблется от 29 до 48%.Современная методика полимеразной цепной реакции (ПЦР), основанная на высокой специфичности умножения in vitro последовательности селективной ДНК, оказывает лептоспир в первые дни болезни, даже если их количество незначительно (1-10 клеток / мл). Постановка ПЦР с применением произвольных праймеров позволяет дифференцировать возбудителей на внутривидовом и субсероварному уровнях. Для идентификации лептоспир по этой методике требуется всего 10-12 часов. Особенно показана реакция для выявления возбудителей в моче. ПЦР оказалась положительной в 94,4% случаев.Лептоспиры в исследуемом материале можно обнаружить с помощью метода прямого иммуноферментного анализа. Теперь для ИФА разработаны и внедрены в практику высокоэффективный родоспецифичний диагностикум - пероксидазной анти-Patos 1-конъюгат. Чувствительность метода - 1,5 ТО4 клеток / мл. Результат выдают через 24 ч от начала исследования.

Биологический метод

В случаях загрязнения исследуемого материала посторонней микрофлорой (моча, вода, почва, пищевые продукты и т.д.) проводят заражение гвинейских свинок и золотистых хомячков. Материал вводят внутрибрюшинно или в скарификовану кожу подушечек задних лапок. К L. icterohaemorrhagiae особенно чувствительны гвинейские свинки. Через 5-7 дней после заражения у них возникает лихорадка, желтушное окрашивание склер и слизистых оболочек, кровоизлияния в органы и ткани. Лептоспиры обнаруживают в почках, печени, легких методом темнопольной микроскопии.Для заражения другими сероварами лептоспир наиболее подходящие золотистые хомячки, которым материал вводят подкожно, внутрикожно, в брюшную полость или в вену. После гибели животных от них выделяют чистую культуру и идентифицируют его с помощью реакции агглютинации и лизиса.При отсутствии золотистых хомячков заражают молодых щенков, у которых развивается хронический процесс, который длится несколько месяцев. Лептоспиры легко обнаружить в моче животных.

Серологические исследования

В практических лабораториях чаще применяют реакцию микроагглютинации и лизиса лептоспир (РМАЛ). Для ее постановки используют живые культуры лептоспир 5-12-дневного выращивания с плотностью 50-100 клеток в поле зрения. Лептоспиры должны двигаться без спонтанной агглютинации. Для постановки РМАЛ рекомендованные ВОЗ стандартные культуры 13 серогруппы, кроме того, принимают и диагностические штаммы украинского происхождения. Реакцию ставят в аглютинацийних пробирках или в лунках планшет по стандартной методике.Учет реакции агглютинации проводят путем изготовления из каждой пробирки препарата "надавленные капли" и исследовании его под микроскопом в темном поле зрения. При этом следует различать феномены лизиса и агглютинации, которые наступают одновременно. Лизис характеризуется отеком, зернистостью лептоспир и потерей подвижности. Зернистые лептоспиры склеиваются по 3-8 особей, которые тут же распадаются на отдельные зерна, которые позже лизируются полностью. Лизис происходит в первые пробирках с меньшими разведенными сыворотки. Феномен агглютинации выглядит в поле зрения как образование клубков ("паучков"), т.е. склеивания лептоспир между собой. Он наблюдается в следующих пробирках с большими разведенными сыворотки. Диагностический титр реакции составляет 1:100 и более для лизиса, 1:400-1:1600 и более для агглютинации. Реакцию необходимо ставить повторно методом парных сывороток для определения нарастания титра антител.Для определения специфических антител используют также химически стабильные микрокапсулы с адсорбированными на эритроцитах барана антигенами лептоспир. Показатели микрокапсульного аглютинацийного теста в 5-8 раз выше, чем в РМАЛ. Антитела с помощью этого высокоспецифического теста можно обнаружить на 1-3-й дни болезни.Начали широко использовать и реакцию непрямой гемагглютинации с соответствующими родоспецифичнимы и серогрупоспецифичнимы эритроцитарными диагностикумами.В последнее время предложено реакцию латекс-агглютинации с липополисахаридним стандартным латексным Ротдаия-диагностикумом.Более чувствительный метод косвенного иммуноферментного анализа. С его помощью протилептоспирозни антитела в диагностическом титре выявляются на 5-й день болезни. Изготовленные диагностические тест-системы для определения антител, где как фермент использованы пенициллиназу или каталаза, которые имеют преимущество по сравнению с пероксидазой хрена.Можно использовать как скрининг на антитела ко многим сероваров лептоспир метод встречного имуноелектрофорезу.Для определения протилептоспирозних антител применяют и РСК. Она высокоспецифические, чувствительная, антитела в ней проявляются раньше, чем в реакции микроагглютинации и лизиса. Антигеном является метаноловые экстракты L. interrogans, сероваров icterohaemorrhagiae, canicola и L. biflexa.

Инфекционисты в Москве

Рязанцева Марина Александровна 27 отзывов Записаться

Цена: 1700 руб.
Специализации: Гепатология, Инфекционные болезни.

Федосюк Александр Васильевич 58 отзывов Записаться

Цена: 1500 руб. 1350 руб.
Специализации: Гастроэнтерология, Гепатология, Инфекционные болезни.

Мыльцев Андрей Анатольевич 182 отзыва Записаться

Цена: 3500 руб. 2275 руб.
Специализации: Аллергология, Иммунология, Инфекционные болезни.

Инфекционисты в Москве

мы с Вами свяжемся и согласуем время