vse-zabolevaniya.ru Подберем лучшего врача в Москве
звоните: 7 (499) 116-78-36
ГлавнаяМикробиологияКлостридии и раневая анаэробная газовая инфекция

Клостридии и раневая анаэробная газовая инфекция

ссылки

Клостридии раневой анаэробной инфекции (газовой гангрены)

Морфология и физиология

С. perfringens - крупные, утолщенные грамположительные спорообразующие палочки. Многие штаммы подвижны, in vivo образуют капсулу. На кровяном агаре окружены зоной гемолиза, на желточном агарезоной помутнения, что свидетельствует о наличии фермента лецитиназы. В столбике агара колонии имеют вид чечевичных зерен. Ферментируют с газообразованием углеводы. Протеолитические свойства выражены слабей. С. novyi - подвижные бескапсульные перитрихи. Эритроциты не гемолизируют. Ферментируют с газообразованием ряд Сахаров. В отличие от предыдущих видов разжижают желатину, образуют сероводород и аммиак. С. histolyticum - перитрихи, факультативные анаэробы. Не ферментируют углеводы, но обладают протеолитической активностью с образованием H2S.

Антигены

C.perfringens различаются по антигенной специфичности секретируемых ими мембранотоксинов, что позволило разделить их на шесть сероваров: А, В, С и т.д. Среди С. novyi выделено три серовара (А, В, С). Выделение данных сероваров не нашло практического применения.

Патогенность и патогенез

В основе патогенного действия всех возбудителей анаэробной раневой инфекции лежит высокая скорость размножения и способность продуцировать токсины - альфатоксин и др. Альфатоксин относится к типу мембранотоксинов. Он вызывает гидролиз фосфолипидов, входящих в состав клеточных мембран, вследствие чего наступает гемолиз эритроцитов, распад тучных клеток, изменение мелких ссудов. При действии на мембраны лейкоцитов снижается фагоцитарная активность последних. Тетатоксин оказывает прямое и опосредованное действие на клетки-«мишени». Первое заключается в разрушении эритроцитов, лейкоцитов эндотелиальных клеток, в обеспечении инвазии и участии в некрозе в очаге инфекции. Второе состоит в воздействии на клетки миокарда и нарушении сердечной деятельности, усилении выхода лейкоцитов и эндотелиальных клеток в ткани, стимуляции выхода противовоспалительных цитокинов, что может привести к шоку. Для патогенных клостридий характерно образование многих ферментов, вызывающих деструкцию тканей: гиалуронидаза, коллагеназа, ДНК-аза и др. Все это, в конечном итоге, приводит к гангренозному, экссудативному или флегмонозному воспалению подкожной клетчатки, особенно мышц, которое сопровождается накоплением большого количества газа и экссудата. Всасывание микробных токсинов наряду с токсическими продуктами распада мышечной ткани, вызывает токсинемию. В тяжелых случаях возможно развитие сепсиса. Существенное значение в патогенезе имеет вторичная микрофлора: непатогенные клостридий, стафилококки и другие бактерии. CI. perfringens может продуцировать энтеротоксин, вызывающий диффузный понос. Серовар А С. novyi продуцирует альфа-токсин, С. septicum - мембранотоксин.

Иммунитет

В процессе инфекции образуются антитоксины, что приводит к формированию антитоксического иммунитета. Он определяется уровнем антитоксина и противоферментативных антител в сыворотке крови. Однако напряженность постинфекционного иммунитета невысока. Противомикробные антитела не обладают протективными свойствами, чтобы препятствовать размножению клостридий. Образующийся антитоксический иммунитет не является напряженным.

Экология и эпидемиология

Средой обитания для клостридий является кишечник животных, особенно травоядных и свиней, для CI. perfringens - и кишечник человека. С фекалиями клостридий попадают в почву, в которой при благоприятных условиях могут размножаться. В почве клостридий сохраняются в виде спор в течение длительных сроков. Инфекция передается при попадании возбудителя с почвой или инфицированным материалом на раневую поверхность. Таким образом, входными воротами инфекции являются раны. Благоприятные условия для размножения анаэробов создаются при осколочных рваных ранах. Анаэробная инфекция в мирное время встречается редко, главным образом, как осложнение открытой травмы, послеоперационных ран и криминальных абортов. Необрабатываемые почвы (скалистые, песчаные) в отличие от плодородных культивируемых почв, не являются источником анаэробной инфекции.

Раневая анаэробная газовая инфекция

Анаэробная газовая инфекция (клостридиальная миозит, газовая гангрена)-острая, тяжелая, полиэтиологична раневая инфекция, которую вызывают бактерии рода Clostridium в ассоциации между собой и условно-патогенными микроорганизмами. Основными возбудителями заболевания являются Clostridium perfrigens, С. novyi (oedematiens), С. septicum. Значительно реже встречаются С. histolyticum, C.sordellii, C.fallax. С аэробных бактерий в раневого содержимого обнаруживают протей, стафилококки, кишечные палочки и др.. С. perfrigens может вызвать пищевые токсикоинфекции.В качестве исследуемого материала берут кусочки пораженных тканей, раневой содержание, экссудат, выпот при отеках, при пищевых токсикоинфециях - рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, кровь, остатки подозрительной пищи. В случае необходимости исследуют перевязочный и шовный материал (шелк, кетгут), одежда, грунт, секционный материал (кусочки некротизированных тканей, печени, селезенки). С целью предупреждения вредного воздействия кислорода воздуха на анаэробную микрофлору твердые материалы для исследования лучше брать в короткие пробирки, герметически закрываются. Жидкие исследуемые материалы можно набирать в шприц, на иглу посадить резиновый пробку и в таком виде транспортировать в лабораторию.Микробиологическая диагностика газовой гангрены сводится к выделению чистых культур возбудителей, их идентификации на основе морфологических, культуральных и биохимических свойств и определения типов токсинов.

Бактериоскопия

Бактериоскопия является необходимым этапом для ориентации в характере раневой микрофлоры. Для этого готовят мазки-отпечатки с пораженных тканей, экссудата или выпота, окрашивают по Граму или метиленовой синькой. Наличие в мазках большого количества крупных грамположительных палочек со спорами или капсулами (С. perfringens) или без них может служить признаком возможного развития газовой гангрены.С целью ориентировочной идентификации клостридий можно использовать люминесцентно-серологический метод, когда мазки обрабатывают диагностическими флуоресцентными сыворотками. По виду сыворотки, которая вызывает специфическое свечение вокруг оболочек бактерий под люминесцентным микроскопом, определяют вид возбудителя.

Бактериологическое исследование

Жидкие исследуемые материалы сеют в нативном виде. Кусочки пораженных тканей и другие плотные материалы сначала гомогенизируют в фарфоровую ступку с песком, добавляя равный объем изотонического раствора хлорида натрия. Любой материал разделяют на 2 части; одну из них прогревают 20 мин при 80 ° С, вторую не подвергают термической обработке. Обе пробы параллельно высевают на специальные сердовища для культивирования анаэробных микроорганизмов.Для накопления анаэробов широко используют среду Китт-Тароцци. На нем С. perfringens растет с интенсивным помутнением и бурным газообразованием. Другие виды образуют помутнение и меньшее выделение газа или без него (С. histolyticwn). При посеве на стерильное обезжиренное лакмусовой молоко С. perfringens уже через 4-5 ч вызывает его звудження с образованием кирпичного цвета губчатого сгустка, который газ поднимает на поверхность пептонизованои жидкости.Классическим средой для получения изолированных колоний являются кровяное сахарный агар Цейслера (до МПА добавляют 1,5% дефибринированной крови и 2% глюкозы). Чашки с посевами выращивают в анаеростати. На этом агаре колонии основных возбудителей имеют гладкую дискообразной форму серого цвета с равными или бахромчатые краями и открытым центром, окруженные зоной гемолиза.На среде Уиллиса-Хоббса (МПА с лактозой, индикатором нейтральным красным, яичным желтком и обезжиренным молоком) колонии С. perfringens красного цвета и зоной опалесценции; колонии С. novyi бесцветные (не разлагают лактозы), но с зоной опалесценции; колонии С. septicum красные, вокруг колоний С. histolyticum есть зона просветления.Колонии С. histolyiticum, С. sordellii бесцветные, а ореол опалесценции имеют только колонии С. sordellii. На кровяном агаре с бензидином колонии С. novyi чернеют после пребывания на воздухе.При посеве материала уколом в столбик агара Вильсона-Блера уже через 3-4 часа в участках роста С. perfringens среду чернеет. Характерные особенности роста на молоке и среде Вильсона-Блера используют для экспресс-диагностики газовой гангрены, вызванной С. perfringens.Колонии, выросшие на дифференциально-диагностических средах, микроскопируют, пересевают на среду Китт-Тароцци, получают чистую культуру и идентифицируют ее по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам. Важное значение имеет определение типов экзотоксинов.При отсутствии анаеростатив и других приборов для создания анаэробных условий изолированные колонии, а значит и чистые культуры, можно получить путем посева различных разведений исследуемого материала в трубки Виньяль-Вейона методом Вейнберга. Материал разводят 1:10, 1:100, 1:1000 в растопленном и охлажденном до 45 ° С сахарном агаре, разлитом в пробирки по 10 мл. Из каждого разведения агар натягивают в трубки, а капиллярный конец запаивают на огне. После инкубации при 37 ° С трубки распиливают надфилем, столбик агара с характерными колониями анаэробов выталкивают в стерильную чашку Петри. Затем колонии петлей пересевают в среду Китт-Тароцци, выращивают чистые культуры и идентифицируют их.В ряде развитых стран оранизовани специальные лаборатории, в которых используются современные аппараты и тест-системы для культивирования и идентификации анаэробов, а также боксы, где все посевы, пересев и другие манипуляции проводят при полном отсутствии кислорода воздуха.Однако в рутинных бактериологических лабораториях выделения и полную идентификацию чистых культур проводят редко, поскольку весь процесс занимает много времени, требует сложных и дорогостоящих питательных сред и специальных приборов. В связи с этим для более быстрой диагностики анаэробной газовой инфекции и выбора соответствующих лечебных антитоксических сывороток проводят определение типов экзотоксинов с помощью реакции нейтрализации in vivo.

Биологические исследования

Для постановки теста нейтрализации используют видовые диагностические антитоксические сыворотки, центрифугат (фильтраты) бульонных культур и белых мышей массой 16-18 г. В 6 пробирок вносят по 0,9 мл центрифугату, затем в 5 из них добавляют по 0,6 мл антитоксических сывороток к основным видам возбудителей. В 6-в пробирку вносят 0,6 мл изотонического раствора хлорида натрия (контроль). Смеси выдерживают в термостате в течение 40 мин и каждую из них в объеме 0,5 мл вводят двум мышам. Видовую принадлежность культуры (токсина) определяют за мышами, выживших при гибели животных контрольной и других исследовательских групп.В лабораториях, где есть возможности работать с культурами тканей, реакцию нейтрализации ставят на трипсинизованих клетках 10-12 дневных куриных эмбрионов.Токсигенность можно определить еще на этапе роста изолированных колоний. Для этого колонию эмульгируют на стекле в капле акридинового оранжевого, накрывают покровным стеклом и исследуют под люминесцентным микроскопом. Наличие только зеленых палочек свидетельствует об их токсигенность. Красные или зеленые с красными фрагментами бактерии проявляют при слабой продукции токсинов или при полном их отсутствии.Можно установить вид и тип токсина в реакции преципитации на стекле в агаровом геле с фильтратом и соответствующие антисыворотки в реакции торможения in vitro специфическими антителами лецитиназной или лейкотоксичнои активности фильтратов или раневых экссудатов.Еще быстрее и точнее устанавливают виды возбудителей газовой гангрены с помощью газовой хроматографии, которая позволяет определять их по качественным и количественным содержанием насыщенных и ненасыщенных жирных кислот.

Диагностика пищевых токсикоинфекций

Диагностику пищевых токсикоинфекций, вызванных С. perfringens типа А и С, проводят с помощью бактериологического исследования с целью выделения возбудителя, определение массивности контаминации ним пищевых продуктов и типа токсинов.Выделение чистых культур проводят так же, как и при анаэробной газовой инфекции (посев материала на среды Цейслера, Уиллиса-ХОБСМЭ или в трубки Виньяль-Вейона, получения изолированных колоний, чистых культур, идентификация).При этом обязательно сиютьИО мл крови больного в 150-200 мл среды Китт-Тароцци с целью выделения С. perfringens. С фильтратом культуры важно поставить реакцию нейтрализации на мышах для определения типа экзотоксина.Важно провести и количественный микробиологический анализ. Для этого исследуемый материал разводят в пептонной воде с 10 по 1010 и по I мл каждого разведения засевают в растопленное и охлажденное до 45 ° С среду Вильсона-Блера. Через 6-8 ч инкубации при температуре 45-46 ° С (или 20 ч при 37 ° С) отбирают те пробы, в которых выросло 10-30 колоний, и вычисляют количество бактерий в 1 мл посевного материала, учитывая степень разведения и посевную дозу .Для быстрого обнаружения С. perfringens исследуемый материал сеют в пробирку с лакмусовой молоком. Через 4-5 ч происходит характерно образование губчатого сгустка и просветление сыворотки.Диагноз пищевой токсикоинфекции устанавливают тогда, когда обнаруживают значительное обсеменение (106 и более в 1 г) тех продуктов, которые вызвали заболевание, выделяют С. pergringens типов А и С и соответствующие экзотоксины, или высевают из крови больного G perfringens любого серотипа ( А, В, С, D, Е, F).

Диагностика псевдомембранозного колита

С. difficile является частым нозокомиальных патогенов, который в 90-100% случаев вызывает это заболевание на фоне нерациональной терапии антибиотиками (ампициллин, клиндамицин, цефалоспорины). Указанные препараты вызывают глубокое дисбаланс микрофлоры кишечника и колонизацию слизистой С. difficile. Бактерии продуцируют 2 вида токсинов - энтеротоксин (токсин А) и цитотоксин (токсин В).Лабораторный диагноз псевдомембранозного колита требует взятия псевдомембран при колоноскопии и выделение возбудителя из биоптатов слизистой оболочки слепой кишки или стула. С. difficile высевается почти от всех больных с помощью тех же методов, что и при других анаэробных инфекциях. "Золотым стандартом" является цитотоксический тест: фильтрат фекалий или культуры вносят во флакон с монослоем культуры клеток, в результате этого возникает цитопатическое действие, нейтрализуется специфической антисывороткой. К сожалению, он достаточно громоздок и требует много времени.Быстрая латекс-агглютинация применяется часто, но она не является высоко-специфической и часто дает ложно-положительные и ложно-отрицательные результаты. Более точным и высокоспецифичным является иммуноферментный анализ, позволяющий надежно обнаруживать цитотоксин и энтеротоксин С. difficile.

Профилактика и лечение

Вакцинопрофилактика не проводится. Для пассивной профилактики, так же как и для терапии, применяют антитоксическую поливалентную сыворотку или иммуноглобулин, полученный из этой сыворотки, который вводят внутримышечно в возможно более короткие сроки после ранения. В случае идентификации возбудителя показано введение антитоксической сыворотки против токсинов клостридий данного вида. Для этиотропного лечения применяют антибиотики (беталактамы, аминогликозиды), которые эффективны против клостридий, а также возбудителей вторичной инфекции. Анатоксин не получил применения для профилактики этого заболевания вследствие его низкой иммуногенности.

Инфекционисты в Москве

Рязанцева Марина Александровна 27 отзывов Записаться

Цена: 1700 руб.
Специализации: Гепатология, Инфекционные болезни.

Федосюк Александр Васильевич 58 отзывов Записаться

Цена: 1500 руб. 1350 руб.
Специализации: Гастроэнтерология, Гепатология, Инфекционные болезни.

Мыльцев Андрей Анатольевич 182 отзыва Записаться

Цена: 3500 руб. 2275 руб.
Специализации: Аллергология, Иммунология, Инфекционные болезни.

Инфекционисты в Москве

мы с Вами свяжемся и согласуем время