vse-zabolevaniya.ru Подберем лучшего врача в Москве
звоните: 7 (499) 116-78-36
ГлавнаяМикробиологияЭшерихий и эшерихиозы

Эшерихий и эшерихиозы

ссылки

Эшерихий

Род E.coli подразделен на многочисленные биовары и серовары, различающиеся некоторыми биохимическими, антигенными и патогенными свойствами. Кишечную палочку впервые выделил из фекалий человека в 1885 г. Т. Эшерих. В дальнейшем было установлено, что подобные бактерии широко распространены в природе. Они встречаются в кишечнике почти всех видов млекопитающих, птиц, рыб и рептилий, а также в воде, почве и других объектах окружающей среды. Вид Е. coli включает условно-патогенные штаммы, являющиеся постоянными обитателями кишечника человека.

Морфология и физиология

По своим морфологическим и тинкториальным свойствам Е. coli напоминает другие энтеробактерий. Среди кишечных палочек встречаются подвижные и неподвижные варианты. Некоторые штаммы имеют выраженную капсулу или микрокапсулу и формируют на плотной среде S- и R-формы колоний. Е. coli - факультативный анаэроб, хорошо растет на обычных питательных средах при слабощелочной реакции среды и оптимальной температуре 37°С. Рост и размножение бактерий возможны при довольно значительных колебаниях рН среды и температурного режима. Кишечная палочка обладает наиболее высокой ферментативной активностью. Она утилизирует ацетат в качестве единственного источника углерода, восстанавливает нитраты в нитриты. Ферментирует глюкозу и другие углеводы. Большинство штаммов ферментирует лактозу с образованием кислоты и газа. Однако встречаются варианты, медленно сбраживающие лактозу или вовсе не обладающие этой способностью.

Антигены

Кишечная палочка имеет сложную антигенную структуру. Она содержит соматический, или О-антиген, поверхностный (капсульный) К-антиген и жгутиковый Н-антиген. О-антигены у бактерий рода Escherichia имеют сходную химическую структуру и связаны с Л ПС клеточной стенки. Н-антигены имеются только у жгутиковых форм бактерий и состоят из белка флагеллина. О-антигены являются основными антигенами, определяющими серологическую группу эшерихий. В настоящее время описано около 170 О-серогрупп Е. coli. Большинство эшерихий, принадлежащих к разным О-серогруппам, связаны друг с другом перекрестными антигенными связями. Около 100 серогрупп имеют антигенные связи с шигеллами, сальмонеллами и другими энтеробактериями. К-антигены представлены тремя антигенами, обозначаемыми буквами А, В и L. Они отличаются друг от друга чувствительностью к нагреванию и химическим веществам. К-антигены обладают способностью маскировать О-антигены, которые можно выявить только после разрушения первых кипячением культуры. Эшерихий содержат около 97 разных К-антигенов, преимущественно В-типа. Н-антигены в отличие от О- и К-антигенов являются типоспецифическими. У эшерихий описано 50 разных Н-антигенов. Антигены эшерихий обозначают антигенными формулами, указывающими на серогруппу, например, Е. coli 026 : К60 (В6), или серовар - Е. coli 026 : КбО(Вб) : Н2. Патогенность для людей связана с определенными серогруппами.

Патогенез

По патогенетическим и эпидемиологическим особенностям вызываемых Е. coli заболеваний их можно подразделить на две группы:1. Возбудители эндогенных инфекций - гнойно-воспалительных процессов различной локализации. К ним относятся пиелиты, циститы, холициститы и др., за исключением нагноения ран. Последние относятся к экзогенной инфекции, возникающей преимущественно в ассоциациях с другими бактериями (Staphylococcus, Proteus, Pseudomonas aeruginosa и др.). Все перечисленные инфекции нередко классифицируют как коли-бактериозы, вызываемые условно-патогенными бактериями. Е. coli при выраженном иммунодефиците могут вызвать сепсис. 2. Возбудители острых кишечных инфекций (ОКЗ), которые представляют собой типичные экзогенные инфекции, называемые эшери-хиозами (диареи). Их вызывают энтеропатогенные эшерихий (ЭЭ) или энтеропатогенные кишечные палочки (ЭПКП) и подразделяют на четыре группы:а) ЭПКП - возбудители коли-энтеритов, вызывающих сальмо-неллоподобные инфекции;б) ЭТКП, вызывающие холероподобные инфекции;в) ЭИКП, вызывающие дизентериеподобные инфекции;г) ЭГКП, вызывающие геморрагический колит.

Эшерихиозы

Термином эшерихиозы обозначают группу инфекционных заболеваний, которые вызывают бактерии рода Escherichia семейства Enterobacteriaceae. Чаще всего эти заболевания вызывает Е. соlи (99%). Очень редко они могут вызвать Е. blattae, Е. fergusonii, Е. hermannii, Е. vulneris.Нужно различать два вида эшерихиоза: 1) заболевания, которые вызывает условно-патогенная кишечная палочка, обычный представитель фоновой микрофлоры кишечника; 2) заболевания, вызывающие патогенные серовары эшерихий.К первому виду заболеваний относятся коли-сепсис, септикопиемии, менингиты новорожденных, гнойно-воспалительные процессы желчных, мочевых и респираторных путей и т.д.. Они возникают лишь при ослаблении резистентности макроорганизма (иммунодефициты, авитаминозы, голодание, на фоне других заболеваний). Они не передаются от больного к здоровому человеку и тем более не распространяются эпидемически.Ко второму виду заболеваний относятся коли-энтериты (коли-инфекции), которые поражают преимущественно детей младшего возраста, передаются от больного к здоровому и время регистрируются в виде эпидемических вспышек. Возбудители таких коли-инфекций в последнее время подразделяют на пять типов: энтеротоксигенными кишечные палочки (ЕТКП), энтеропатогенные (ЭПКП), ентероинвазивни (ЕИКП), ентерогеморагични (ЕГКП) и етероадгезивни (ЕАКП) кишечные палочки.Энтеротоксигенные эшерихии порой вызывают холероподобные заболевания, энтеропатогенные - классические коли-энтериты, ентероинвазивни - дизентериеподобная поражения, ентерогеморагични - диареи с выделением крови. Последний тип (ентероадгезивни кишечные палочки) изучены еще недостаточно. При бактериемии и инфекции мочевыводящих путей часто высевают серогруппы 01, 02, 04, 06, 08, 09, 011, 018 и др.., При менингитах - 01, 06, 07, 016, 018, 083.Микробиологическая диагностика эшерихиоза имеет особо важное значение, поскольку их клинические проявления характеризуются отсутствием патогномоничных симптомов отношении возбудителя. Ведущим остается бактериологический диагноз. Его особенность заключается в том, что выделение и идентификация возбудителя базируется на определении его антигенной структуры, а не на изучении биохимических свойств.

Взятие материала для исследования

До начала этиотропного лечения у больных берут испражнения, рвотные массы, дуоденальное содержимое, кровь, мочу, навоз, спинномозговую жидкость, от трупов - кровь из сердца, содержание кишечника, кусочки легких, печени, селезичкы, почек. При необходимости исследуют промывные воды желудка, остатки пищи, смывы с рук обслуживающего персонала, воздух палат и т.п..

Бактериоскопическое исследование

В отдельных случаях делают первичную микроскопию крови, мочи, ликвора, гнойных выделений, секретов слизистых оболочек в мазках, окрашенных по Граму. Обнаружение грамотрицательных палочек помогает бактериологов выбрать соответствующие питательные среды и следующие этапы лабораторной диагностики. Начальная бактериоскопия испражнений не проводится.

Бактериологическое исследование

Из последних порций испражнений тампоном берут часть фекалий в пробирку с транспортным средой (30% глицерина и 70% фосфатного буфера) или непосредственно у постели больного сеют на среду Эндо (Левина, Плоскирева, Асель-Либермана). При этом небольшое количество фекалий эмульгируют в 0,85% растворе хлорида натрия в соотношении 1:10. Через несколько минут после оседания грубых остатков 1-2 капли жидкости вносят на поверхность среды и стеклянным шпателем растирают ее на небольшом участке. Оторвав шпатель от агара, производят посев на остальные поверхности среды. Если возникает необходимость посеять на вторую и третью чашки, материал наносят повторно. Кровь (10 мл) засевают во флакон с МПБ. Посев других материалов делают так же, как и стула.После инкубации в термостате при 3 7 ° С в течение суток изучают характер роста на элективные-дифференциальных средах. На агаре Эндо колонии имеют дискообразной форму, слегка выпуклые с ровными краями, малиново-красного цвета. На среде Левина они окрашены в темно-синий цвет, а на средах Плоскирева и Асель-Либермана - в розовый. В состав последнего среды входит агар, лактоза (или сахароза) и индикатор конго-красный. Среда с сахарозой используют для индикации тех энтеропатогенных эшерихий, которые ферментируют этот углевод. В связи с тем, что колонии патогенных и непатогенных кишечных палочек на указанных средах не отличаются, принадлежность выделяемых культур патогенных серогрупп определяют с помощью слайд-агглютинации с диагностическими поливалентными ОК-сыворотками, или адсорбированными О-сыворотками, содержащими антитела к определенным О-антигенов. Микробиологическая промышленность выпускает 5 наборов диагностических ОК-сывороток: ОКА, ОКВ, ОКС, ОКД и ОКЕ. Основная поливалентная сыворотка ОКА содержит антитела к О-и К-антигенов более 20 главных серологических групп. Смесь ОК-сывороток готовят так, чтобы конечное разведение каждой из них было 1:10. Агглютинирует 10 лактозоположительных колоний. Материал из каждой колонии берут петлей так, чтобы часть ее осталась для дальнейшего пересева. Если одна из колоний дала положительную слайд-агглютинацию, ее остаток пересевают на среду Олькеницького. Через 18-20 ч учитывают ферментацию лактозы и глюкозы (пожелтение и разрыв колонки и скошенной части агара), выделения H2S (образование черного кольца на границе столбца и скошенной части). Выделенную культуру ориентировочно относят к определенной серогруппы.Для окончательной идентификации возбудителя необходимо поставить развернутую реакцию агглютинации в пробирках для отдельного выявления его О-и К-антигенов. Диагностические агглютинирующие сыворотки разводят в двух рядах пробирок (в первом - О-сыворотку, во втором - К-сыворотку) до титра, который указан на этикетках ампул. Для определения О-антигена в каждую пробирку первого ряда вносят по 2 капли 2-х млрд суспензии выделенной культуры, прогретой в течение 2 ч при 100 ° С. При кипячении инактивируется К-антиген, который локализуется поверхностно и задерживает агглютинацию О-антигена. Последний при прогреве не разрушается. Для выявления К-антигена в каждую пробирку второго ряда с разведенной до титра сывороткой вносят по 2 капли суспензии живого (не кипяченой культуры). Пробирку помещают в термостат при 37 ° С на 18-20 час. При положительной реакции развернутой агглютинации до титра (или по крайней мере до половины титра) делают окончательный вывод о выделении соответствующего серовару патогенных эшерихий. Отрицательная слайд-агглютинация 10 лактозоположительных колоний эшерихий дает право дать ответ об отсутствии энтеропатогенных кишечных палочек.Выделенное в среде Олькеницького культуру, которая дала положительную развернутую реакцию агглютинации, сеют на среды Гисса для изучения ее сахаролитических, пептолитичних свойств и подвижности. После инкубации посевов в течение суток учитывают результаты. Патогенные эшерихии ферментируют лактозу, глюкозу, мальтозу, маннит, сахарозу (некоторые штаммы), арабинозы, ксилозу, трегалозу, образуют индол, не выделяют H2S (некоторые штаммы образуют сероводород), не разлагаются инозит и мочевину, не дезаминують фенилаланин, дают отрицательную реакцию Фогес -Проскауэра и не синтезируют ДНК-азу. Для выявления источника инфекции проводят фаго-и колицинотипування выделенных культур.Идентификация диареегенних серотипов возможна также на основе выявления специфических маркеров. Культуры типа ЕТКП производят два вида токсинов: термостабильный обнаруживают на мишатах-сосунка, термолабильный - на культурах Y1 надпочечников. Для быстрой идентификации ЭПКП используют реакцию коаглютинации на стекле дуия обнаружения белка внешней мембраны. Серотипы ЕГКП, особенно серовар 0157: Н7, не ферментируют сорбит. Ентероинвазивни кишечные палочки (ЕИКП) вызывают конъюнктивит у гвинейских свинок при внесении бактерий в конъюнктивальный мешок (тест Серени), неподвижные, не ферментируют салицин. Они также выделяют шигаподибни токсины SLT-1 и SLT-2, которые обнаруживают в испражнениях больных с помощью ИФА. Адгезивные свойства эшерихий (ЕАКП) обнаруживают на культурах Неиа и Нед-2.Самым быстрым и високоспецифиччим методом диагностики заболеваний, вызванных энтеропатогенных эшерихии, является использование специфических ДНК-зондов. Они позволяют выявить гены плазмид, кодирующих патогенность кишечных палочек или синтез их цитотоксин. Метод основан на том, что одноцепная молекула ДНК может гибридизуватися с комплементарным к нее вторым цепью ДНК. В большинстве патогенных эшерихий гены вирулентности локализованы в плазмидах. Итак, зондом для обнаружения этих бактерий могут быть меченые последовательности, клонированные из таких плазмид.

Серологическое исследование

Выявление антиешерихиозних агглютининов в сыворотке крови больных с диагностической целью в рутинной лабораторной практике не нашло широкого применения. Антитела если и обнаруживаются, то в низких титрах (не выше 1:100). Для серологической диагностики коли-инфекций более чувствительной и специфичной является реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Специфический антиген для этой реакции производится путем сенсибилизации эритроцитов барана суспензией 48 ч. агаровой культуры эшерихий, прогретой 2 часа при 100 ° С. Итак, с помощью РНГА можно обнаружить лишь О-антитела, что может быть использовано для дифференциации заболеваний от бактерионосительства, особенно, если взять для реакции эритроцитарный диагностикум с автоштамом.Достоверность серологической диагностики эшерихиоза возрастает при выявлении отдельных классов имуноглуболинив. Изменение повышенной концентрации IgM на IgG обусловлена острым инфекционным процессом. Обнаружение в сыворотке крови антител только класса IgG свидетельствует о бактерионосительства.Так, лабораторная диагностика эшерихиоза основана на выделении возбудителя заболевания и последующей идентификации патогенных и непатогенных штаммов кишечной палочки с помощью диагностических ОК-сывороток в ориентированной и развернутой реакциях агглютинации.

Инфекционисты в Москве

Рязанцева Марина Александровна 27 отзывов Записаться

Цена: 1700 руб.
Специализации: Гепатология, Инфекционные болезни.

Федосюк Александр Васильевич 58 отзывов Записаться

Цена: 1500 руб. 1350 руб.
Специализации: Гастроэнтерология, Гепатология, Инфекционные болезни.

Мыльцев Андрей Анатольевич 182 отзыва Записаться

Цена: 3500 руб. 2275 руб.
Специализации: Аллергология, Иммунология, Инфекционные болезни.

Инфекционисты в Москве

мы с Вами свяжемся и согласуем время