Франциселла туляремии

Названы в честь Е. Франциса. Второе название дано по наименованию района Туляре в США, где в 1912 г. был выделен возбудитель туляремии - Francisella tularensis. К данному роду относится большое количество бактерий, патогенность которых для человека не установлена.

Морфология и физиология

F. tularensis представляют собой мелкие грамотрицательные коккобактерии, не образующие ни спор, ни жгутиков. Окружены мало выраженной капсулой. Аэробы, требовательные к питательному субстрату. Культивируют на питательных средах, содержащих цистеин, яичный желток, либо на кровяном агаре с цистеином и глюкозой. Бактерии туляремии образуют небольшие колонии беловатого цвета. На жидких средах растут на поверхности среды. Ферментируют глюкозу, мальтозу и другие сахара с образованием кислоты. Некоторые штаммы ферментируют глицерин, что используется для дифференциации этих бактерий.

Антигены

Содержат Vi-антигены и О-антигены, связанные с клеточной стенкой.

Патогенность и патогенез

Факторы вирулентности у франциселл туляремии примерно такие же, как и у ряда других грамотрицательных бактерий, в частности бруцелл. Адгезия происходит на эпителиальных клетках респираторного и кишечного трактов за счет капсулы и белков наружной мембраны клеточной стенки. Они обладают высокой инвазивностью, о чем свидетельствует их способность проникать в организм через неповрежденную кожу и слизистые оболочки глаз, носоглотки, гортани, пищеварительного тракта. Далее они проникают в лимфоциты региональных лимфоузлов, где размножаются и попадают в кровяное русло, вызывая состояние бактериемии. Токсичность этих бактерий связана с освобождением эндотоксина (ЛПС) при их разрушении.

Иммунитет

При туляремии наблюдается клеточный и гуморальный иммунный ответ. Первый приводит к развитию ГЗТ, которая появляется в начале заболевания и сохраняется в течение многих лет. Антитела обусловливают напряженный гуморальный иммунитет.

Экология и эпидемиология

Туляремия - природно-очаговая зоонозная инфекция. Естественные хозяева возбудителя туляремии - грызуны (водяные крысы (ондатры), полевки, домовые мыши и др.). Туляремия зарегистрирована у многих видов диких животных. Заражение людей происходит при прямом контакте с больными животными и их трупами, а также через объекты внешней среды (вода, пищевые продукты и др.),инфицированные грызунами. В воде и зараженных продуктах возбудитель сохраняет свою жизнеспособность в течение длительного срока. Возможно заражение трансмиссивным путем при укусах кровососущими членистоногими (комары, клещи, слепни).

Туляремия

Туляремия - острая инфекционная болезнь с природной вогнищевиегю, характеризуется лихорадкой, поражением лимфатических узлов, кожи, миндалин, легких, глаз и других органов. Возбудитель заболевания Francisella tularensis. Туляремийные бактерии в S-форме имеют два антигена - О и Vi (капсульный). О-антиген обнаруживает родство к антигенам бруцелл. Различают три подвида возбудителя туляремии: голарктические (для стран северного региона), Неарктического (американский) и среднеазиатский. Резервуаром и источником инфекции являются различные виды диких и домашних грызунов (ондатры, водяные крысы, зайцы, мыши, хомяки и др.)., А также домашние животные (свиньи, овцы, коровы). Человек зачтется только от животных, от человека к человеку возбудитель не передается. Заражение происходит контактно-бытовым путем (при контакте с больными животными и их выделениями) алиметарним (при употреблении инфицированных продуктов питания и воды) воздушно-пылевым (во время обмолота зерновых, обработки фуража и т.п.); трансмиссивным (через укусы кровососущих насекомых). Для человека минимальная инфицирующая доза - одна микробная клетка. При проведении диагностики туляремии используют бактериологический, биологический, серологический и аллергический методы. Предпочтение отдается серологическим реакциям и аллергическим пробам, которые можно провести в любых клинических и микробиологических лабораториях. Заражение лабораторных животных и выделение чистых культур возможно только в лабораториях диагностики особо опасных инфекций. В зависимости от клинической формы туляремии, у больных берут такие материалы для исследования: слизь из ротоглотки, пунктат бубона, мокрота, кровь, гной из конъюнктивы, содержимое пустул и язв. Исследуют также органы погибших грызунов, воду, воздух, кровососущих насекомых, пищевые продукты, контаминированных выделениями животных и грызунов. Взятие материала и его доставка в лабораторию осуществляется при строгом соблюдении правил работы с возбудителями особо опасных инфекций.

Биологическое и бактериологическое исследование

Бактериологический метод диагностики туляремии имеет важную особенность - выделить возбудитель в первых генерациях непосредственно от больного почти никогда не удается. Поэтому исследуемым материалом сначала заражают гвинейских свинок (лучше) или белых мышей, а потом от них выделяют и идентифицируют чистую культуру. Этот метод является самым чувствительным для выявления туляремийных бактерий в любом материале. DLM для этих животных - одна микробная клетка. Заражают два гвинейские свинки или 3-5 белых мышей. Животные погибают на 5-14 сутки. Если они остаются живыми, их забивают, вскрывают, кровь, костный мозг, эмульгированные лимфатические узлы и паренхиматозные органы сеют на свернутое желтковая среду Мак-Коя и Чепино или глюкозо-цистиновыми кровяной агар Френсиса. При необходимости к сред добавляют 100 ЕД пенициллина для подавления роста посторонней микрофлоры. Предложено также жидкое элективные среды с аминокислотами, витаминами, микроэлементами. На простых средах возбудитель туляремии не растет. Туляремийные бактерии можно выделить путем заражения в желточный мешок куриных эмбрионов, где их легко обнаружить с помощью метода иммунного флуоресценции. Посевы выращивают в термостате в течение 3-5 дней при температуре 37 ° С. Параллельно с посевами из тех же материалов погибших животных готовят мазки-отпечатки и окрашивают их по методу Романовского-Гимза. Возбудители туляремии имеют вид маленьких (0,2-0,7 мкм) коккообразные или палочковидных бактерий. В мазках из органов они имеют нежную капсулу. На среде Мак-Коя и Чепино туляремийные бактерии растут в виде нежных маленьких колоний, напоминающие капельки росы. На агаре Фрэнсиса колонии круглые с гладкой поверхностью, молочного цвета, слизистые, окружены зеленым ореолом. Жидкая среда мутнеет, на дне образуется слизистый осадок. Типичные колонии исследуют микроскопически, пересевают в полужидкую элективные среды в пробирке; культуры, выросшие идентифицируют по морфологическим (очень мелкие грамотрицательные кокобактерии), культуральным признакам (не растут на простых средах), биохимическими (раскладывают глюкозу, мальтозу, левулезы, выделяют сероводород , не образуют индола) и в реакции агглютинации со специфическим агглютинирующие сывороткой. Последняя реакция и позитивная биопроба являются решающими при определении возбудителя туляремии. Для выделения туляремийных микробов из воды 1 л ее предварительно фильтруют через мембранные фильтры или центрифугируют. Ресуспензованим осадком из мембраны или со дна центрифужные пробирки заражают белых мышей. Смывы с различных объектов и пищевые продукты исследуют на наличие возбудителей туляремии также методом биопробы.

Серологическая диагностика

В обычных клинических условиях для диагностики туляремии проводят только серологические реакции и аллергическую пробу с тулярином. Начиная с 10-12 дня болезни ставят объемную реакцию агглютинации, которая по методике не отличается от реакции Райта. У больного берут 2-3 мл крови из локтевой вены или пальца, получают сыворотку, которая должна быть абсолютно прозрачной. Реакцию ставят с разведенными сыворотки от 1:50 до 1:800, сопровождая ее соответствующими контролями. Антигеном в реакции агглютинации служит туляремийный диагностикум, в 1 мл которого содержится 10 млрд. микробных тел. Перед употреблением его разводят в 10 раз. Пробирки встряхивают и ставят в термостат на 2 ч, затем выдерживают 18-20 ч при комнатной температуре и анализируют результаты. Диагностическое значение имеет титр 1:100. Такая концентрация антител наступает в конце 2-й недели, после чего титр аглютинив нарастает в 4-8 раз, в то время как у переболевших ранее он остается практически неизменным.

Кровяно-капельная реакция

Кровяно-капельную реакцию агглютинации употребляют как ускоренный ориентировочный метод диагностики туляремии, особенно при массовых обследованиях. На тщательно обезжиренное стекло берут толстую каплю крови из пальца больного. К ней добавляют такой же объем дистиллированной воды, чтобы вызвать гемолиз. Рядом наносят каплю туляремийного диагностикума (5 млрд микробных тел в 1 мл). Обе капли смешивают стеклянной палочкой. При наличии у больных титра антител 1:100 и выше агглютинация на стекле наступает немедленно, при более низких титрах - через 2-3 мин. У всех больных с положительным кровяно-капельной пробой ставят объемную реакцию агглютинации. Очень чувствительным методом серологической диагностики туляремии является реакция непрямой гемагглютинации. Она эффективна как при ранней, так и при ретроспективной диагностике, а также для определения уровня антител после вакцинации. Антигеном для РНГА служит туляремийный эритроцитарный диагностикум (консервированные формалином бараньи эритроциты, сенсибилизированные туляремийным антигеном). Методика постановки РНГА при туляремии такая же, как и при бруцеллезе. Гемаглютинацийни титры сывороток у больных достигают 1:1280-1:2560 и выше. Высокочувствительная и специфическая непрямая реакция иммунофлюоресценции. Диагностикум для РТФ является взвесь вакцинного штамма туляремийных бактерий в концентрации 500 млн / мл. Сыворотку разводят от 1:5 до 1:640. Диагностическим титром считают разведение 1:40 и более, которое дает яркое свечение поверхности микробных клеток. Положительная РИФ бывает также у переболевших ранее и вакцинированных. Для ранней диагностики туляремии используют также РСК на холоде. Кровь у больного берут в конце 1-й недели заболевания, антигеном служит диагностикум. В природных очагах туляремии для контроля за развитием эпизоотии среди грызунов используют РНГА и ИФА с целью виялення антигенов в тушках грызунов и птиц.

Аллергические пробы

Аллергические пробы отнесены к ранним и высокоспецифичных методов диагностики туляремии. Они становятся положительными уже с 3-5-го дня болезни. Для постановки проб используют 2 препарата тулярином. Первый содержит 500 млн. бактерий в 1 мл, второй - 10 млрд. Согласно используют внутрикожный метод введения тулярином с меньшей концентрацией микробных тел и накожный - для более концентрированного препарата. Для постановки внутрикожной пробы 0,1 мл тулярином вводят в кожу предплечья. При постановке кожной пробы на наружную поверхность плеча наносят каплю тулярином и через нее делают 2 параллельных насечки длиной 8-10 мм, плоским боком пера втирают препарат в насечки. Реакцию учитывают через 24 и 48 час. За положительную пробу считают развитие инфильтрата диаметром 5 мм и более. Положительная проба на протяжении нескольких лет остается у переболевших и вакцинированных лиц.

Профилактика и лечение

Специфическая профилактика туляремии проводилась живой вакциной Гайского-Эльберта, получение которой явилось в свое время большим достижением советских ученых. Для лечения применяют антибиотики широкого спектра действия.