vse-zabolevaniya.ru
ГлавнаяМикробиологияБациллы сибирской язвы и сибирская язва (злокачественный карбункул)

Бациллы сибирской язвы и сибирская язва (злокачественный карбункул)

ссылки

Бациллы сибирской язвы

Впервые описаны Полендером в 1849 г. и позднее исследованы Р. Кохом и Л, Пастером.

Морфология и физиология

Возбудитель сибирской язвы - В. anthracis - грамположительные крупные палочки с «обрубленными» концами, располагающиеся длинными цепочками. Во внешней среде образуют споры, сохраняющиеся в почве в течение многих десятилетий. В организме людей и животных образуют белковую капсулу. На твердых средах формируют R-формы колоний. Обладает сахаролитическими и протеолитическими свойствами, разжижает желатину «елочкой», что используется для идентификации данных бактерий.

Антигены

В.anthracis содержит два вида антигенов: групоспецифический соматический полисахаридный и видоспецифический капсульный антигены. Первый термостабилен, не разрушается при кипячении и длительно сохраняется во внешней среде. На этом свойстве основана реакция Асколи, имеющая важное практическое значение. Капсульный антиген в отличие от капсульных антигенов других бактерий является полипептидом, а не полисахаридом. Третий антиген, связанный с белковым токсином, называют протектив-ным, поскольку к нему образуются антитела, обладающие протективными свойствами.

Патогенность и патогенез

К факторам вирулентности В. anthracis относятся прежде всего капсульный полипептид, который участвует в адгезии бактерий на чувствительных клетках макроорганизма, например, энтероцитах кишечника или эпителиоцитах респираторного тракта. Вместе с тем он обладает выраженным антифагоцитарным действием. Протеазы широкого спектра обеспечивают инвазию. Существенную роль в патогенезе всех форм сибирской язвы играет белковый токсин, который характеризуется как протективный антиген, летальный фактор и отечный фактор. О протективной активности свидетельствует выработка антител (антитоксинов). Летальный и отечный факторы по механизму действия можно отнести к цитотоксинам и функциональным блокаторам. В зависимости от входных ворот инфекции различают кожную, легочную и кишечную формы сибирской язвы. При кожной форме возбудитель проникает в глубокие слои дермы на границе подкожной клетчатки, вызывая образование специфического карбункула - очага геморрагическо-некротического воспаления. Возбудитель из места внедрения заносится макрофагами в регионарные лимфатические узлы, в которых развивается воспаление. При кожной форме в 1-2% случаев и значительно чаще при других формах развивается септицемия вследствие генерализации процесса.

Иммунитет

После перенесения сибирской язвы формируется напряженный гуморальный антитоксический иммунитет, в котором существенную роль играют антитела - антитоксины к протективному антигену - белковому токсину. Особое значение в иммунитете имеет Т-зависимая аллергия, проявляющаяся в ГЗТ.

Экология и эпидемиология

Сибирская язва - острая особо опасная инфекция преимущественно сельскохозяйственных животных и людей. По мнению одних ученых естественной средой обитания для сибиреязвенных бацилл является почва, в которой возбудитель размножается и длительное время сохраняется в виде спор. Инфицирование почвы происходит через выделения больных животных и захоронения их трупов. Другие считают, что почва является только хранилищем спор. Возбудитель передается людям через продукты, приготовленные из инфицированного материала, особенно мяса при уходе за больными животными, обработке животного сырья. В ряде случаев заражение происходит через кровососущих насекомых - слепней, мух-жигалок, аэрозольным путем (болезнь старьевщиков), а также при контактах со шкурками и кожей от больных животных. Лабораторная диагностика. Наиболее достоверным является бактериологическое исследование,заканчивающееся выделением чистой культуры возбудителя и ее идентификацией с использованием теста «жемчужного ожерелья», которое появляется на питательном агаре с пенициллином вследствие превращения бактерий в протопласты. Для выявления зараженности сырья (меховых шкурок, кожи и т.д.) используют реакцию термопреципитации Асколи. Для определения зараженных животных используют кожно-аллергическую пробу.

Сибирская язва (злокачественный карбункул)

Сибирская язва - острое особо опасное инфекционное заболевание домашних и диких животных, от которых заражаются и люди путем прямого контакта с больными животными и разнообразной сырьем. Выделяют кожную, легочную и кишечную формы болезни.Возбудитель сибирской язвы - Bacillus anthracis - принадлежит к роду Bacillus семьи Bacillaceae. Род Bacillus объединяет еще несколько видов бацилл, с которыми необходимо дифференцировать выделенные культуры сибиреязвенных палочек. Главные из них - B.cereus, B. anthracoides, В. subtilis, В. megaterium.

Взятие материала и отсылки проб

При проведении лабораторной диагностики сибирской язвы у человека исследуют различные материалы в зависимости от клинической формы заболевания: при кожной форме - содержимое везикул, карбункулов, при кишечно - стул; легочной - мокроты. Кровь исследуют при всех клинических формах. От трупа берут кровь, кусочки паренхиматозных органов. Если немедленно засеять материал от трупа невозможно, крови, пунктатов костного мозга и селезенки на предметных стеклах готовят толстые мазки и высушивают.Все пробы помещают в стеклянные банки, флаконы, пробирки. Высушенные мазки кладут в чашки Петри, обертывают вощаной или пергаментной бумагой, пакет надписывают "Осторожно, мазки нефиксированные!" Весь отобранный материал тщательно укладывают в металлический или деревянный ящик, пломбируют или опечатывают сургучом, на крышке пишут "Верх, осторожно!" Оформляют сопроводительный документ, в котором указывают какой материал, место и время забора, от кого принято, и нарочным немедленно отправляют в специальной (режимной) лаборатории.Вскрытие животных, погибших от сибирской язвы, не проводят, поскольку это способствует споруляции и рассеиванию возбудителя. При необходимости разрешается брать только ухо, его помещают в банку, а место разреза прижигают паяльной лампой или концентрированным раствором карболовой кислоты. Берут также образцы шкур, шерсти, шерсти, щетины. В ряде случаев исследуют пищевые продукты (мясо), воду, почву. Лабораторная диагностика сибирской язвы состоит из нескольких этапов: бактериоскопии мазков, выделения и идентификации чистой культуры возбудителя, постановки биопробы, реакции термокильцепреципитации Асколи, постановки аллергической пробы.

Бактериоскопический метод

Из крови, содержимого везикул, мокроты производится по 4 мазки из каждой пробы, окрашивают их по Граму, Романовскому-Гимзе, сибиреязвенных люминесцентной сывороткой, раствором Ребигера, который одновременно фиксирует и окрашивает препарат. Из разных способов выявления капсул метод Ребигера является простым и найдемонстративнишим. Берут 15-20 г генцианы фиолетового и растворяют в 100 мл 40% формалина. Раствор выдерживают при комнатнойтемпературе несколько часов, затем фильтруют. Нефиксированный мазок окрашивают 15-20 секунд, промывают, высушивают. Тело бацилл окрашивается в темно-фиолетовый, а капсулы - в красно-фиолетовый цвет, по Романовскому-Гимзе - тело клеток приобретает голубоватый, а капсула - светло-розового цвета. При обработке мазка флуоресцентной сывороткой бациллы сибирской язвы под люминесцентным микроскопом выглядят как большие палочки, окруженные ярко светлым зеленоватым ободком. Наличие в мазках типовых бацилл, которые располагаются цепочками, окруженными капсулами, дают специфическую флуоресценцию, обусловливает возможность поставить предварительный диагноз сибирской язвы.

Бактериологическое и биологическое исследование

Окончательный диагноз сибирской язвы можно поставить только после выделения чистой культуры и положительной биопробы на животных. Исследуемый материал сеют в МПБ, чашки с МПА и кровяным агаром. Посевы инкубируют при температуре 37 ° С в течение 18-20 час. Одновременно с посевами эмульгированных исследовательским материалом заражают подкожно лабораторных животных. Белым мышам его вводят у корня хвоста - 0,1 мл, гвинейским свинкам под кожу живота - 0,2 мл, кроликам - 0,5-3,0 мл.В бульоне наблюдается рост в виде пучка ваты, при микроскопии которого видно типичное расположение микробов в виде длинных цепочек (стрептобациллы). На поверхности МПА вырастают крупные шероховатые матовые R-формы колоний с неровным, волокнистым, кудрявым краем ("голова медузы", "львиная грива"). Такие колонии необходимо изучать под малым увеличением микроскопа в проходящем свете. На кровяном агаре колонии имеют S-или SM-форму без гемолиза, в то время как вокруг колоний антракоидив возникает большая зона просветления среды.На МПА и МПБ В. anthracis при обычных аэробных условиях растет без образования капсул, что не позволяет определить одну из важнейших ее признаков.Для выявления капсулоутворення лучшими способами является заражение белых мышей с последующей окраской мазков-отпечатков из органов и посевы на специальный элективный агар Буза (Венгрия) и Тома (Болгария) или на среду, содержащую раствор Хэнкса и 40% стерильной бычьей сыворотки. Посевы выращивают в атмосфере 20-40% С02. На следующий день 2-3 подозрительные колонии после микроскопии отсеивают на скошенный МПА для выделения чистой культуры.Животные погибают через 24-36 ч от острой септицемии, проводят их вскрытие, делают посевы из крови, селезенки и исследуют мазки-отпечатки как выше описано.На 3-й день исследования заражают белых мышей, но уже чистой культурой, проводят дополнительные посевы и выполняют тесты для ее окончательной идентификации и дифференциации от антракоидив и некоторых бацилл почвы. При этом учитывают главные и дополнительные признаки. К основным критериям относят специфическую патогенность, капсулоутворення, тест "жемчужного ожерелья" на среде с пенициллином, лизис специфическим фагом, люминесцентно-серологический тест. Дополнительными признаками являются лецитиназную активность, отсутствие подвижности и гемолиза.Специфическую патогенность определяют введением белым мышам 0,2 мл суспензии культуры. Обнаружение в мазках-отпечатках из органов погибших животных крупных палочек, окруженных капсулой, свидетельствует о наличии у микробов специфической патогенности. При заражении мышей слишком большими дозами культур почвенных бацилл у животных иногда наступает заболевание, но феномен капсулоутворення отсутствует.Тест "жемчужного ожерелья" проводят так. К бульону Хоттингера с лошадиной сывороткой (30%) добавляют пенициллин в количестве 0,5 ЕД / мл и сеют 2 капли молодой выделенной культуры. Через 3 ч роста в термостате производят мазки, окрашивают метиленовым синим и микроскопируют. Сибирской бациллы располагаются в виде цепочек из шаровидных форм, напоминающие бусы из жемчуга. Сапрофитные фунтовые бациллы, нечувствительны к пенициллину, растут как обычно, и в мазках обнаруживают палочковидные цепочки.Для выявления фаголизабельности выделенных штаммов на подсушенный МПА в чашке Петри с расчерченным на квадраты дном бактериологической петлей диаметром 5 мм на каждый квадрат наносят большую каплю 5-6 - часовой культуры. Чашку снова подсушивают 30 минут и затем в центр каждой бляшки культуры петлей диаметром 2 мм наносят маленькую каплю специфического сибиреязвенного бактериофага. Учет результатов проводят через 5-6 ч инкубации при 37 ° С. Если культура относится к В. athracis, в месте нанесения на нее фага видно лизис в виде стерильной пятна. Ни один вид сапрофитных бацилл нечувствителен к действию специфического фага.Быстро идентифицировать выделенную культуру можно с помощью диагностической сибиреязвенных сыворотки, меченной флуоресцеина (родамином). Мазок из капсульной культуры фиксируют метанолом, затем в течение 20 мин обрабатывают люминесцентной сывороткой, промывают буферным раствором, высушивают и микроскопируют под люминесцентным микроскопом. В мазках вокруг клеток с капсулой наблюдается специфическое свечение в виде ярко-зеленых ободков. Теперь чаще используют косвенный вариант РИФ.Отсутствие подвижности выявляют методом надавленные (висячей) капли или посевом уколом в пробирку с полужидким агаром, а отсутствие гемолиза устанавливают после посева на кровяной агар. Пробы на лецитиназой и фосфатазу проводят с помощью общепринятых методик.Так, крупные грамположительные неподвижные палочки с капсулами, растущие в виде характерных R-форм колоний, высокопатогенные для экспериментальных животных, дают тест "жемчужного ожерелья", ярко светятся при обработке сибиреязвенных люминесцентной сывороткой, идентифицируют как В. anthracis.В тех случаях, когда выделить возбудителя из исследуемого материала очень трудно или вообще невозможно (трупы животных, кожа, мех, шерсть, шерсть), а также при контроле животного сырья на некоторых производствах, широко используют очень чувствительную и специфическую реакцию термокильцепреципитации Асколи. Она позволяет обнаруживать в материале даже незначительное количество антигена сибиреязвенных бацилл.Термостабильный антиген из исследуемых материалов экстрагируют кипячением или "холодным" способом. Сначала материал измельчают, затем заливают 10-кратным объемом 0,85% раствора хлорида натрия, кипятят 10-15 мин, фильтруют через асбестовую вату. В некоторых случаях материал заливают тройным объемом 0,5% раствора уксусной кислоты. При этом происходит более полноценное экстрагирования антигена."Холодный" метод чаще применяют при массовом обследовании кож и другого сырья. Пробы материала стерилизуют в автоклаве, измельчают, заливают 10-кратным объемом изотонического раствора и оставляют при температуре 6-16 ° С на 20-24 ч, фильтруют так же. Во всех случаях антиген должен быть максимально прозрачным.Второй компонент реакции - Преципитирующие сыворотку - получают путем гиперимунизации лошадей вакциной СТИ или убитой культурой В. anthracis.В преципитацийни пробирки вносят 0,2-0,3 мл Преципитирующие сыворотки, а затем осторожно наслаивают 0,3 мл термоекстракту. На границе двух жидкостей образуется через 2-5 мин тонкое кольцо преципитата беловатого цвета (помутнение жидкости). Появление осадка через 10 мин считают неспецифической реакцией. Параллельно ставят несколько контролей: Преципитирующие сыворотка + положительный естракт; Преципитирующие сыворотка + естракт с несибиркового материала; Преципитирующие сыворотка + изотонический раствор; нормальная сыворотка + термоестракт и др.. Первый контроль должен быть всегда положительный, все остальные - отрицательными.

Серологическая диагностика

Серологическая диагностика сибирской язвы проводится редко, преимущественно в тех случаях, когда возбудитель болезни выделить не удается. Для выявления антител в сыворотке крови больных используют такие высокочувствительные методы, как РНГА, ИФА, реакция коаглютинации с протективных сибиреязвенных антигеном.

Аллергический метод

Организм больных и переболевших сибирской язвой человека, а также после вакцинации реагирует местной аллергической реакцией на внутрикожное введение аллергена. Состояние сенсибилизации возникает уже на 4-5 день болезни и сохраняется очень долго. Аллергеном для постановки пробы служит антраксином - белково-полисахаридный комплекс, полученный путем гидролиза вегетативных форм сибиреязвенных бацилл. Препарат вводят внутрикожно на ладонной поверхности предплечья в объеме 0,1 мл. Результат учитывают через 24 и 48 час. Пробу считают положительной при возникновении гиперемии и инфильтрата диаметром более 15 мм.

Профилактика и лечение

Для специфической профилактики сибирской язвы используют живую вакцину, полученную отечественными учеными. Специфический противосибиреязвенный иммуноглобулин применяют для поздней профилактики и лечения данного заболевания. Из антибиотиков используют беталактамы, аминогликозиды, тетрациклины и другие препараты.

Инфекционисты в Москве

Рязанцева Марина Александровна 27 отзывов Записаться

Цена: 1700 руб.
Специализации: Гепатология, Инфекционные болезни.

Федосюк Александр Васильевич 58 отзывов Записаться

Цена: 1500 руб. 1350 руб.
Специализации: Гастроэнтерология, Гепатология, Инфекционные болезни.

Мыльцев Андрей Анатольевич 182 отзыва Записаться

Цена: 3500 руб. 2275 руб.
Специализации: Аллергология, Иммунология, Инфекционные болезни.

Инфекционисты в Москве

мы с Вами свяжемся и согласуем время