Культуральный метод - это этап бактериологических исследований. Для выявления и определения возбудителя инфекционного заболевания проводят посев материала от больного на питательные среды. После выделения культуры (чистых колоний микроорганизма) проводят лабораторное изучение свойств и определение возбудителя.
С помощью культурального исследования можно выявить заболевания, вызванные не только болезнетворной, но и условно-болезнетворной микрофлорой. Это наиболее дорогостоящий и длительный, но очень точный метод исследований, на основании результатов которого назначают антибактериальную терапию.
Для проведения бактериологического посева необходимы сведения о предварительном диагнозе. Материал от больного сеют на питательную среду и помещают в определенные условия (температура, доступ или отсутствие кислорода и др.). Условия выращивания культуры и питательные среды подбирают в зависимости от возбудителя, который предположительно собираются получить на основании предварительного диагноза. По возможности используют элективные питательные среды, на которых растет только определенный вид микроорганизмов. Универсальной питательной средой является кровяной агар - в такой среде растут большинство микроорганизмов, особенно относящихся к условно-болезнетворным.
Бактериологическое исследование занимает обычно 3-е суток. В это время при необходимости больному назначают антибиотики широкого спектра действия. После получения заключения исследования лечение корректируют.
Недостатком этого метода являются особые требования к забору материала от больного, в качестве которого выступают кровь, кал, моча, соскобы с кожи и слизистых. Биоматериал от пациента берут до начала антибактериальной терапии в стерильную герметично закрытую емкость.
Перед закрытием стерильной пробирки или флакона с биоматериалом края отверстия обжигают пламенем спиртовки. Биоматериал хранят в холодильнике. Мочу и кровь собирают в сухую посуду, а прочий биоматериал в посуду с консервантом.
В лаборатории стерильным шпателем или металлической петлей делают посев биоматериала - штриховыми движениями распределяют его по питательной среде. В материале от больного могут содержаться посторонние микроорганизмы, способные помешать выделению культуры возбудителя. В этом случае используют биологический метод выделения культуры возбудителя заболевания.
Если существует вероятность содержания возбудителя в биоматериале в очень малом количестве, то посев делают на жидкие обогащенные питательные среды, так как в жидкой среде размножение микроорганизмов происходит более активно.
Далее биоматериал повторно сеют, но уже на плотные питательные среды. Бактериологические посевы в жидкие питательные среды делают в пробирках, а в плотные - в чашках Петри. Посуду с посевом помещают в термостаты для создания оптимальных условий для роста колоний предполагаемого возбудителя заболевания.
На первом этапе в питательной среде обычно вырастают колонии нескольких микроорганизмов, поэтому по внешним признакам отбирают чистые колонии предполагаемого возбудителя - культуру. Культуру возбудителя исследуют сначала невооруженным глазом, а затем с помощью микроскопа. При описании колоний микроорганизма имеют значение их размеры и форма, характеристики краев и поверхности, консистенция, структура. Далее готовят препарат для микроскопии, окрашивают его. В процессе микроскопии определяют особенности окрашивания культуры (если оно происходит), структуру клеток. Таким образом, определяют принадлежность возбудителя к определенному роду микроорганизмов.
Часть культуры повторно сеют на питательные среды и в течение 18-24 ч. выдерживают в термостате, накапливая микроорганизмы для дальнейшего исследования.
Число выросших колоний имеет большое значение для выявления заболеваний, вызванных условноболезнетворной микрофлорой. Большое число колоний в этом случае свидетельствует о чрезмерном росте микроорганизмов, являющихся причиной заболевания.
Каждая колония разрастается из одного микроорганизма, поэтому, учитывая количество консерванта и жидкой питательной среды, в которых разводят биоматериал, и число выросших колоний, можно определить содержание микроорганизмов в полученном от больного материале.
Далее проводят точное определение вида возбудителя с помощью изучения его биохимических, токсигенных и антигенных свойств. Для выявления биохимических свойств микроорганизма делают посев на различные питательные среды и изучают происходящие в них ферментативные реакции. Микроорганизмы способны расщеплять белки и углеводы, восстанавливать и окислять различные вещества. При этом каждый микроорганизм имеет в своем составе или выделяет в процессе жизнедеятельности определенные ферменты, которые вызывают соответствующие реакции.
Токсигенные свойства определяют реакцией нейтрализации, для проведения которой используют анатоксины.
При необходимости выявляют подвид микроорганизмов фаготипированием и изучением антигенных свойств. Фаготипирование заключается в посеве культуры возбудителя на плотную питательную среду, к выросшим колониям добавляют диагностические фаги (пожиратели микроорганизмов). Поглощая возбудителя заболевания, фаги разрушают его колонии. При этом возбудитель может быть чувствительным сразу к нескольким фагам. В ходе культурального исследования определяют чувствительность возбудителя к противомикробным препаратам.
При бактерионосительстве в биоматериале болезнетворный микроорганизм содержится в малом количестве, поэтому для его выявления проводят повторные исследования.
Существуют экспресс-методы культурального исследования, проводимые с помощью индикаторных бумажек. Культуру возбудителя можно получить уже через 6-12 ч. без многочисленных посевов.