Токсоплазмоз

Токсоплазмоз - хроническая паразитарная болезнь, характеризующаяся поражением нервной и лимфатической систем, скелетных мышц, миокарда, глаз, печени, селезенки, кишечного тракта. Различают приобретенный и врожденный токсоплазмоз. Возбудителем болезни является Toxoplasma gondii, который принадлежит к семейству Eimeriidae, класса Sporozoa. Чаще всего источником инфекции являются кошки, собаки, свиньи, реже - другие домашние животные и грызуны. Заражение происходит преимущественно алиментарным путем при употреблении в пищу недостаточно термически обработанного мяса или через руки, загрязненные испражнениями кошек. Возможна и трансплацентарно передача возбудителя от матери к плоду. Диагностировать токсоплазмоз по клиническим симптомам довольно трудно. Поэтому лабораторные паразитологические исследования имеют очень важное значение. Материалом для выявления возбудителя может быть пунктат лимфоузлов, костного мозга, кровь, спинномозговая жидкость, биоптаты тканей, от трупов - кусочки головного мозга, печени, селезенки, легких, при патологической беременности - соскобы из полости матки и плаценты и околоплодная жидкость. Доставленный материал подлежит микроскопическом, культуральной, биологическом и серологические исследования. Используют также и аллергическую пробу.

Микроскопическое исследование

С доставленных клинических материалов изготавливают мазки, отпечатки или гистологические срезы, которые фиксируют этанолом (метанолом) и окрашивают по методу Романовского-Гимза. По своей форме токсоплазмы напоминают дольку апельсина длиной 4-7 мкм, шириной 2-4 мкм. Один конец возбудителя заостренный, другой слегка закругленный. Цитоплазма окрашивается в голубой цвет, имеет вид однородной массы с мелкими гранулами. Вакуоли, как правило, отсутствуют, либо имеют маленькие размеры. Полюса клетки окрашиваются более интенсивно. Ядро имеет рубиново-красный цвет, расположенный в центре или чуть ближе к одному из полюсов. Кроме единичных паразитов в препаратах могут наблюдаться скопление токсоплазм - псевдоцисты и цисты. Псевдоцисты образуются при размножении возбудителя в клетках хозяина. Они не имеют своей собственной оболочки, а лишь оболочку клетки. После многократных делений клетка разрушается и токсоплазмы высвобождаемых проникают в новые клетки и цикл размножения повторяется снова. Такое микроскопическую картину - наличие псевдоцист и свободных токсоплазм - выявляют в острый период болезни. В хронической или латентной стадии инфекции токсоплазмы обнаруживают преимущественно в тканях макроорганизма (скелетные мышцы, ткани глаза, головной мозг, миокард, легкие, матка) в виде настоящих цист; имеющих оболочку, образованную самыми паразитами. Размеры цист колеблются от 20 до 100 мкм. Обнаружение свободных токсоплазм, псевдоцист и настоящих цист имеет беспрекословное диагностическое значение, хотя положительные результаты этот метод дает не так уж часто. К тому же, время по токсоплазмы считают дрожжевые и другие клетки.

Биологическое исследование

Для постановки биопробы из исследуемого материала, взятого у больного или после его смерти, изготавливают гомогенат и вводят по 1,0 мл в брюшную полость или головной мозг белых мышей или золотистых хомячков. Через 7-14 дней (реже через месяц) после гибели и вскрытия животных в перитонеальном экссудате микроскопически обнаруживают токсоплазмы. Можно также исследовать печень, селезенку и легкие погибших животных. В головном мозге появляются настоящие цисты. Для их выявления шмато.чок мозговой ткани раздавливают между предметным и покрывных стеклами, микроскопируют при малогйу увеличении. Можно также делать мазки-отпечатки из мозговой ткани, фиксировать их метанолом и красить по Романовскому-Гимзе. Если инфицированные животные не погибают, за ними наблюдают в течение 6 недель, после чего ставят серологические реакции для выявления специфических антител. Для биологической пробы последнее время используют 7-8-дневные куриные эмбрионы, которые чаще заражают в хорион-алантоисну оболочку. Можно культивировать токсоплазмы и в культуре клеток Неиа и др..

Серологические исследования

Серологические исследования в современной диагностике токсоплазмоза используют чаще при рациональном и комбинированном применении различных иммунологических реакций, имеющих высокую ценность. Специфические антитела к токсоплазм можно обнаружить с помощью реакций иммунофлюоресценции, связывания комплемента, непрямой гемагглютинации и латекс-агглютинации. Высокочувствительная и специфическая проба Сэбина-Фельдмана. Реакцию иммунофлюоресценции используется в косвенном варианте. Антигеном для нее служит взвесь убитых токсоплазм, которую выпускают централизованно. Сначала к антигену добавляют сыворотку больного, затем образованный комплекс антиген-антитело обрабатывают меченым флуорохромом антиглобулиновою сывороткой. Диагностическое значение имеет титр 1:80 и выше. С помощью этой реакции выявляют антитела к токсоплазм уже в конце первой недели болезни. Для диагностики врожденного токсоплазмоза ставят вариант этой реакции - РИФ-IgM (тест Ремингтон). Он выявляет антитела класса IgM, которые не проходят через плаценту, а, следовательно, их наличие свидетельствует об инфицировании новорожденного. Реакцию связывания комплемента ставят, начиная с третьей недели болезни, по классической схеме реакции Борде-Жане. Антиген для РСК изготавливают из перитонеального экссудата зараженных токсоплазмами белых мышей или гвинейских свинок. Рекомендуют ставить реакцию повторно, что позволяет выявить нарастание титра комплементсвязывающих антител. С диагностической метоир используют также реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Принцип ее заключается в том, что танизовани эритроциты легко адсорбируют на себе формализованных антиген токсоплазмы. При последующем добавлении сыворотки больного, в случае наличия в ней антител, такой эритроцитарный диагностикум аглютинуеться. Необходимо помнить, что все эти серологические реакции при хроническом токсоплазмозе могут быть отрицательными. Широкое практическое использование для диагностики и массовых эпидемиологических обследований получила серологическая реакция с красителем Сэбина-Фельдмана. Она становится положительной уже в конце первой недели болезни. Механизм этой реакции состоит в том, что при действии специфических антител на мембрану живых токсоплазм последние становятся непроницаемыми для красителя (метиленового синего), а следовательно, не окрашиваются и не теряют своей серповидной формы. Токсоплазмы, обработанные нормальной сывороткой, при добавлении метиленового синего окрашиваются полностью и превращаются из серповидных в круглые формы. Реакцию считают положительной, если не окрашиваются более 50% токсоплазм, при этом учитывают только внеклеточно расположенные паразиты. Диагностический титр составляет 1:64 и выше. До внедрения в лабораторную практику флуоресцентных методов проба Сэбина-Фельдмана считалась надежным методом серологической диагностики токсоплазмоза. Недостатком реакции является то, что для ее постановки необходимо иметь свежий штамм токсоплазм, она технически сложна и не совсем безопасна. В последнее время ее постепенно вытесняют такие высокоспецифические методы, как иммуноферментный и радиоиммунный. В частности для ИФА используют растворимый стандартный антиген токсоплазмы и антитела к иммуноглобулина человека, меченые пероксидазой или фосфатазой.

Аллергическая проба

Наиболее доступным методом диагностики токсоплазмоза является внутрикожная проба с токсоплазмином. Она становится положительной с 4-й недели болезни и сохраняется в течение многих лет. Техника ее постановки такая же, как и реакции Манту. Учет реакции проводят через 24-48 час. При положительном результате в месте введения токсоплазмина возникает отек и покраснение кожи. Проба позволяет выявить сенсибилизацию организма в результате инфицирования токсоплазмами, но не позволяет судить об активности процесса. Для правильной комплексной оценки результатов лабораторных исследований и аллергической пробы нужно параллельно использовать 2 серологические реакции и внутрикожную пробу. Только таким образом можно поставить или отвергнуть диагноз на основе совпадения (или наоборот) этих реакций, особенности динамики нарастания титра антител. Это также решает вопрос, есть ли у больного недавно приобретенный токсоплазмоз, уже давно перенесенном заболевании.