Лейшманиозы

Лейшманиозы - группа хронических антропонозных трансмиссивных болезней, вызываемых лейшманиями и передаются москитами; распространены среди населения тропических и субтропических стран. Различают кожный лейшманиоз, вызываемый Leishmania tropica и характеризуется поражением кожи; кожно-слизистый лейшманиоз, возбудителем которого является Leishmania brasiliensis, сопровождающееся поражением кожи и слизистых оболочек висцеральный лейшманиоз, вызываемый Leishmania donovani, характеризуется преимущественным поражением внутренних органов. Каждый из трех видов лейшманиозов регистрируется в определенных эндемичных регионах планеты. Все три вида лейшманий относятся к семейству Trypanosomatidae, класса Mastigophora и имеют идентичные морфологические свойства. Жизненный цикл этих паразитов состоит из двух стадий: безджгутиковои (амастиготнои) - в организме человека и жгутиковых (промастиготнои) - в теле москита. Безджгутикови формы являются внутриклеточными паразитами системы мононуклеарных фагоцитов, имеют овальную форму, размеры 3-5 мкм в длину и 1-3 мкм в ширину. Жгутиковые формы большие по размеру (10-15x4-6 мкм), монотрихы, активно подвижные, хорошо культивируются на питательных средах. Источником и резервуаром инфекции в природе являются домашние и дикие животные (собаки, лисы, шакалы) и грызуны. Материалом для лабораторной диагностики лейшманиозов кожи и слизистых оболочек служит содержание язв и краевого инфильтрата, биоптаты пораженных тканей, пунктаты лимфоузлов, корочки слизистой. Для увеличения частоты выявления лейшманий важно правильно взять материал. Участок кожи, где есть бугорок или краевой инфильтрат вокруг язвы сжимают между большим и указательным пальцем левой руки для обескровливания, затем скальпелем делают поверхностный надрез эпидермиса, соскабливают кусочки тканей из стенок и дна разреза. Соскоб вместе с каплей жидкости используют для изготовления мазка. У больных висцеральный лейшманиоз берут кровь, пунктаты костного мозга, печени, селезенки, лимфатических узлов. Проводят микроскопические, культуральные, биологические и серологические исследования, а также постановку аллергических проб.

Микроскопическое исследование

Микроскопическое исследование является наиболее информативным и распространенным методом диагностики всех видов лейшманиозов. Изготовленные мазки фиксируют этанолом, метанолом или смесью Никифорова, окрашивают по методу Романовского-Гимза, микроскопируют под иммерсионным объективом. Цитоплазма амастиготив и промастиготив окрашивается в голубой, а ядро, кинетопласт и жгутики - в красный или розово-фиолетовый цвет. При висцеральной форме болезни лейшамии обнаруживают в пунктатах костного мозга или селезенки в 95-100% случаев, а в пунктатах лимфатических узлов - в 40-75%. Иногда паразитов можно увидеть и в мазках крови (при индийском висцеральном лейшманиозе почти всегда). У больных кожную и слизистую формы лейшманиоза в крови возбудителей практически не проявляют; в мазках из язв и пораженных тканей их также мало. Поэтому необходимо повторять исследования несколько раз. Безджгутикови формы лейшманий (амастиготы) располагаются преимущественно в цитоплазме гистофагоцитарних клеток. При изготовлении мазков эти клетки часто разрушаются и паразиты могут находиться и вне клеток. Они имеют шаровидную или овальную форму, содержат ядро, палочковидных кинетопласт, но жгутики отсутствуют. Наличие четко очерченного ядра и кинетопласт позволяет отличить лейшманий от других образований, встречающихся в мазках.

Культуральные и биологические исследования

Если микроскопический метод дает отрицательные или сомнительные результаты, проводят посевы взятых проб на NNN-arap. Получить культуры лейшманий при посевах крови удается редко, особенно у больных кожную форму. Посевы инкубируют при температуре 22 ° С в течение 2-10 дней, ежедневно проверяя рост с помощью микроскопии колоний под объективом 40х. Для этого изготавливают нативный препарат методом надавленные капли. В мазках из культур лейшмании приобретают удлиненной, веретенообразной формы, размеры их достигают 10-20 мкм в длину и 5-6 мкм в ширину. Они обязательно имеют жгутики (промастиготы), часто размещаются клубками. Если в течение 40 дней возбудитель не выявлен, выдают отрицательный результат, но это не дает права исключить диагноз лейшманиоза. Лейшмании можно выращивать на хорион-алантоисний оболочке куриного зародыша или в культуре клеток. Сравнительно редко с диагностической целью ставят биологическую пробу. Для этого используют белых мышей, сусликов, золотистых хомячков. Животных заражают внутривенно или внутрибрюшинно пунктата костного мозга, лимфатических узлов, реже кровью больных.

Серологические исследования

Серологические исследования широко используются для проведения эпидемиологических обследований населения в эндемичных регионах, но для практической диагностики заболевания они имеют вспомогательное значение. Чаще ставят реакции непрямой гемагглютинации с эритроцитарных диагностикумов, связывания комплемента и иммунофлюоресценции. В качестве антигена для них используют 15-30-дневные культуры L. donovani. Однако все эти реакции недостаточно специфичны и могут давать положительный результат при трипаносомоза. В последнее время для диагностики висцерального лейшманиоза разработана тест-система для проведения иммуноферментного анализа, в которой антигеном служит неразведенный экстракт культур L. donovani. Метод ИФА оказался более чувствительным, специфичным и экономичным, чем даже непрямая реакция иммунофлюоресценции. Диагностический титр составляет 1:400 и более.

Аллергическая проба

С целью ретроспективной диагностики, а также при массовых эпидемиологических обследованиях населения эндемичных регионов широко проводят постановку внутрикожной пробы с лейшманином (реакция Монтенегро). Антигеном для нее служит поверхностная жидкость или суспензия лейшманий, убитых нагреванием или формалином. Его вводят в объеме 0,1-0,2 мл. При положительной реакции через 6-10 ч в месте инъекции возникает гиперемия, отек и инфильтрация. Максимум реакции наступает через 48 часов.