Эпидемический сыпной тиф

Эпидемический сыпной тиф

Возбудителем сыпного тифа является Rickettsia prowazekii. Заболевание характеризуется внезапным началом, высокой температурой, сильной интоксикацией, поражением прекапиллярных разветвлений артерий и розеолезно-петехиальная сыпь. Любые манипуляции с риккетсиями Провачека очень опасны. Поэтому выделение возбудителя из крови больных или иного изучаемого материала, а также заражение животных, куриных эмбрионов и культур клеток проводят только при научных исследованиях в специальных режимных лабораториях. Широкие возможности для выявления риккетсий в исследуемом материале открывает полимеразная цепная реакция. Уже изготовлены праймеры для родоспецифичнои и видоспецифической диагностики риккетсий с чувствительностью 1-10 клеток на пробу. Метод ПЦР дает змоту рано и быстро поставить диагноз сыпного тифа. При этом можно использовать не только свежий нативный или замороженный материал, но и фиксированный формалином или метанолом. Для выявления риккетсий в исследуемом материале, в организме зараженных животных, курином эмбрионе или в теле вшей, блох и клещей используют микроскопию. Метод окраски мазков должен четко и контрастно выявить как внеклеточные, так и внутриклеточные (в том числе и внутриядерные) формы риккетсий. Для этой цели чаще используют методы Романовскому-Гимзе и Здродовский. При окраске азур-эозином в течение 18-20 ч риккетсии приобретают разные оттенки голубого цвета Мазки при этом необходимо фиксировать метанолом или смесью Никифорова. Скорее проявляют риккетсии при окраске по способу Здродовский. Материал наносят на предметное стекло, фиксируют на пламени, наливают на 5 мин разведенный карболовый фуксин (10-15 капель красителя на 10 мл дистиллированной воды). Препарат обесцвечивают 0,15% раствором уксусной или соляной кислоты, промывают водой и в течение 10 с докрашивают 0,5% водным раствором метиленового синего. Риккетсии окрашиваются в рубиново-красный, цитоплазма клеток - в голубой, а ядра - в синий цвет. Надежные результаты выявления риккетсий в исследуемом материале дают прямой и особенно косвенный методы флуоресценции. Прямой метод заключается в том, что изготовлен и высушенный мазок крови, препарат-отпечаток или тонкий срез органов животных, вшей и др. обрабатывают специфической флуоресцентной сывороткой и исследуют под люминесцентным микроскопом. При наличии риккетсий видно специфическое золотисто-зеленое свечение. Более прогрессивный косвенный метод связан с предварительной обработкой мазков или препаратов обычной иммунной (нелюминесцентною) сывороткой, а затем меченой антиглобулиновою сывороткой против глобулинов того вида животных, на которых получали обычную иммунную диагностическую сыворотку. Возможно также использование антикомплементарных флуоресцентной сыворотки. В обоих случаях при положительном результате видно характерное люминесцентное свечение. А пока для диагностики эпидемического сыпного тифа используют, в основном, серологические реакции, особенно такие, как агглютинации, связывания комплемента, непрямой гемагглютинации, непрямого гемолиза и иммуноферментный анализ.

Серологическая диагностика

Для макроскопической реакции агглютинации Вейгля используют корпускулярный риккетсиозные антиген (500 млн клеток / мл). Сыворотку больного разводят от 1:40 до 1:1280 в объеме 0,25 мл и в каждую пробирку добавляют по 0,25 мл антигена. При этом необходимо учитывать, что после внесения антигена разведение сыворотки удваивается. Учет реакции проводят невооруженным глазом или с помощью аглютиноскопа через 2 часа после того, как пробирки вынули из термостата. Аглютинат риккетсий выглядит как нежный, мелкозернистый осадок на дне пробирки, интенсивность которого обозначают по чотириплюсовою системой. Реакцию Вейгля считают высокоспецифичным. Она выпадает в диагностическом титре 1:40-1:80 и больше почти у 100% больных сыпным тифом уже на 4-5-й день болезни. Еще более достоверные результаты получают при постановке реакции методом парных сывороток. Широко применяемую в прошлом неспецифическую реакцию агглютинации Вейля-Феликса с диагностикумом Proteus vulgaris OX1Q теперь не используют. Достаточно чувствительным и высокоспецифичным методом серологической диагностики сыпного тифа является постановка реакции связывания комплемента. Комплементсвязывающие антитела появляются в сыворотке крови 5-6-й день болезни и достигают максимальных титров на 15-16-й день. Через 1 -2 месяца титр их начинает падать, но эти антитела сохраняются в организме в течение многих лет. РСК особенно часто используют для дифференциальной диагностики между эпидемическим и эндемическим сыпным тифом, а также рецидивной болезнью Брилля-Цинссера. Сыворотку крови больного разводят от 1:10 до 1:250. Антигенами для РСК могут быть как корпускулярные, так и растворимые. Пробирки тщательно встряхивают после добавления каждого компонента. Первую фазу реакции проводят или при низкой температуре в холодильнике в течение 18-20 ч или при 3 7 ° С в течение 60 мин. Вторую фазу реакции после добавления гемолитической системы проводят в термостате в течение 30-45 мин. Учет РСК делают через 1-2 ч после того, как пробирки вынули из термостата, по классической чотириплюсовою системой. Реакцию считают положительной при титре сыворотки 1:60 во время заболевания и 1:10 - при ретроспективной диагностике. Еще более чувствительной является реакция непрямой гемагглютинации, которая становится положительной с 3-4-го дня заболевания. Уже в начальный период болезни диагностический титр РНГА может достигать 1:1000, а через 2-3 недели - 1:4000-1:64000. В связи с этим инактивированную сыворотку больного разводят в пробирках или лунках полистироловых планшет от 1:250 до 1:64000 в объеме 0,4 мл. В каждую пробирку (лунку) добавляют по 0,1 мл антигена, то есть 1% взвеси эритроцитов с адсорбированным на них риккетсиозные антигеном. Пробирки (пластины) тщательно встряхивают и помещают в термостат на 45 мин при температуре 37 ° С. Результат реакции учитывают по наличию или отсутствию гемагглютинации. Обязательном контроле сенсибилизированных эритроцитов на отсутствие спонтанной агглютинации. Высокую чувствительность и специфичность имеет также реакция непрямого гемолиза, которую используют как экспресс-метод диагностики в ранний период болезни. Для ее постановки риккетсиозные антиген адсорбируют на эритроцитах барана, а методика такая же, как и для РНГА, за исключением того, что после добавления антигена в различных разведений сыворотки в каждую пробирку вносят по 0,1 мл комплемента в разведении 1:10. Пробирки помещают в термостат на 60 мин. При положительном результате наступает гемолиз эритроцитов. В контрольных пробирках гемолиз отсутствует. Предварительный учет этой реакции можно проводить уже через 30 мин, а окончательный - через час Для серологической диагностики сыпного тифа предложено иммуноферментный метод в модификации "захвата" антител IgM, которые накапливаются при первичном заболевании, что позволяет дифференцировать его от рецидивной формы Брилля-Цинссера. Есть попытка диагностировать эпидемический вшивый сыпной тиф с работодателем внутрикожной аллергической пробы, которая выявляет гиперчувствительность замедленного типа.