Кандидоз (кандидамикоз) - оппортунистическая инфекционная болезнь кожи, слизистых оболочек и внутренних органов, которую вызывают дрожжевидные грибы рода Candida семьи Cryptococcaceae класса дейтеромицеты. Основным возбудителем является Candida albicans, реже - С. tropicales, С. krusei, С. guillermondii, С. lusitaniae. От других грибов они отличаются отсутствием настоящего мицелия. Иногда образуют псевдомицелий - удлиненные клетки, которые объединяются в цепочки, которые могут иметь терминальные хламидоспоры. Кандидоз встречается повсеместно, чаще всего как осложнение после многих инфекционных заболеваний, при длительном нерациональном лечении антибиотиками и антисептиками, которые подавляют нормальную микрофлору организма, при первичных и вторичных иммунодефицитах. Выделяют четыре основные формы кандидозов: 1. Локальные - поражение кожи, ногтей, ногтевых валиков, слизистых оболочек рта, глотки, влагалища, вульвы. 2. Системные - поражение дыхательных путей, кишечника, мочеполовой и центральной нервной систем. 3. Генерализованные - хронический гранулематозный кандидоз, септикопиемия. 4. Вторичные (аллергические) кандидозы - на фоне сенсибилизации организма возникают новые очаги воспаления, в которых возбудитель отсутствует. Микробиологическая диагностика кандидозов включает микроскопию патологического материала, выделения чистых культур грибов, проведение серологических реакций и постановку аллергических проб. При локальных и системных формах заболевания материал для исследования берут из пораженных участков - чешуйки кожи, соскобы с ногтей, слизь, гной, мокрота, мочу, желчь, ликвор, стул, при генерализованных - кровь, пунктаты абсцессов, биопсийный материал, от трупов - кровь из сердца, кусочки паренхиматозных органов.
Микроскопическое исследование
Под обычным световым, фазово-контрастным или аноптрального микроскопом изучают нативные (неокрашенные) препараты или мазки. Плотный патологический материал (кожные чешуйки, соскобы с ногтей, некротизированные ткани и т.д.) вносят в каплю 10% раствора гидроксида калия или натрия на предметном стекле, осторожно подогревают над пламенем газовой горелки в течение 1 мин и накрывают покровным стеклом. Материал жидкой консистенции исследуют в смеси спирта с глицерином и водой в соотношении 2:1:2, или в растворе Люголя двойной концентрации в препаратах надавленные капли без подогрева. Микроскопия проводят сначала с помощью объектива 8х, а затем 40х. При наличии в исследуемом материале кандид в нативных препаратах обнаруживают круглые или овальные дрожжевые клетки, почкующихся, и псевдомицелий. Грибы кандиды встречаются на коже, слизистых оболочках и у здоровых людей, но, как правило, в небольшом количестве. Поэтому для более достоверной диагностики кандидоза важное количественное определение кандид в исследуемом материале. Обнаружение большого их количества в патологических выделениях (особенно при значительных разведениях) указывает на возможность кандидоза. Лучшие результаты дает исследование окрашенных препаратов. Высушенный тонкий мазок на предметном стекле фиксируют метиловым спиртом или в смеси Никифорова и окрашивают метиленовым синим (1-3 мин), генциановый фиолетовым (2-3 мин), фуксином Пфейфера (1-2 мин). Еще лучше красить мазки сложными методами. При окраске по Граму кандиды имеют темно-фиолетовый цвет, за Ципем- Нильсеном - синий с розово-желтоватыми включениями липидов, по Романовскому-Гимзе - розово-желтый с фиолетовыми включениями волютина. Кандиды можно обнаружить и при гистологическом исследовании срезов из пораженных тканей, окрашенных по методу Грама-Вейгерта или Шабадаша. При ранних сроках поражения можно применить прямой метод флуоресценции при обработке мазков изотиоцианатом флуоресцеина, который дает яркое золотисто-зеленое свечение. Более надежно диагноз кандидоза устанавливают посредством выделения чистой культуры С. albicans.
Микологическое исследования
Любой патологический материал сеют количественным методом на плотную среду Сабуро или сусло-агар, а также в глюкозный МПБ. В стерильных сред перед посевом добавляют пенициллин и стрептомицин для подавления роста сопутствующей бактериальной флоры. Посевы выращивают при температуре ЗО ° С. При росте более 1000 типичных колоний в расчете на 1 г исследуемого материала делают вывод, что кандиды является этиологическим агентом заболевания. Изолированные колонии С. albicans на агаре Сабуро круглые беловато-кремовые, блестящие, гладкие, с ровными краями, напоминающие капли майонеза. Они глубоко врастают в среду. Для выявления псевдомицелия колонии отсеивают в один из жидких сред - глюкозный МПБ, картофельную воду или морковно-рисовый отвар. Сначала появляется муть или осадок, реже - пленка на поверхности среды. Псевдомицелий обнаруживают на 3-5 день или позже при микроскопическом исследовании надавленные капли, пользуясь объективом 8х. Дифференциально-диагностические признаки С. albicans имеют важное значение для идентификации, поскольку этот вид является основным возбудителем кандидоза. На терминальных нитях псевдомицелия С. albicans образуются хламидоспоры - двухконтурные круглые структуры диаметром 10-20 мкм, бластоспоры появляются в результате почкования, располагаются нерегулярно с обеих сторон псевдомицелия. При культивировании в сыворотке или яичном белке при 37 ° С через 2-4 ч бластоспоры образуют характерные «ростовые трубки" или RB - фактор. Те штаммы, которые за столь короткий срок не приобретают "ростовых трубок", как правило, не вирулентные. Для идентификации видов грибов рода Candida используют также их ферментативную активность. С. albicans разлагает глюкозу, мальтозу и галактозу до кислоты и газа, С. tropicales-разлагает те же углеводы и дополнительную сахарозу, а С. fcrusei-только лактозу.
Серологическая диагностика
Серологическая диагностика проводится в основном при висцеральных формах кандидозов. При этом используют реакции агглютинации, связывания комплемента, преципитации, непрямой гемагглютинации, встречного имуноелектрофорезу и метод ИФА с парными сыворотками с использованием общепринятых методик. Результаты считают положительными при нарастании титра соответствующих антител в 4 и более раз. Для постановки реакции агглютинации, преципитации и связывания комплемента лучше использовать антигены из культур, выделенных от данного больного (автоштамы). Для более надежной серологической диагностики кандидоза лучше использовать одну из названных реакций, а две-три.
Биологическая проба
Биологическая проба используется при необходимости определить патогенность и вирулентность С. albicans. Выделенный от больного культуру вводят белым мышам или кроликам. Патогенными признают те культуры, которые в дозе 1 млн клеток вызывают гибель мышей в течение пяти суток, а кроликов - через девять суток.
Кожные аллергические пробы
Кожные аллергические пробы проводят путем внутрикожного введения кандида-аллергена. В качестве аллергена можно использовать поливалентную вакцину, содержит 200 млн клеток в 1 мл. После нагревания вакцины при 80 ° С в течение 2-х ч. ее вводят в объеме 0,1 мл внутрикожно. Положительную реакцию (гиперемия, отек, папула) учитывают через 24-48 часов. Аллергическая проба при кандидозах малоспецифична, поскольку сенсибилизация к грибковым антигенам встречается очень часто и повсеместно.